[发明专利]革耳氯烯酮类化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.革耳菌(Panus rudis)F01315，已于2013年8月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.8151。

2.一种革耳氯烯酮类化合物，其特征在于包括革耳氯烯酮A和革耳氯烯酮B，所述革耳氯烯酮A的分子式为C₂₂H₂₅ClO₆,分子量为420.13，手性碳的相对构型为4R、5R、6R、7R、8S、9S、11R、12S、15S，革耳氯烯酮A的结构式为：

所述革耳氯烯酮B的分子式为C₂₃H₂₇ClO₆，分子量为434.15，手性碳的相对构型为4R、5R、6R、7R、8S、9S、11R、12S、15R，革耳氯烯酮B的结构式为：

3.如权利要求2所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)种子培养：

(1)斜面种子培养：

马铃薯去皮，切成小块，加水煮沸，过滤得马铃薯滤液；在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂，自来水定容，灭菌，得马铃薯培养基；再制成试管斜面，从保藏的甘油管中挑取菌种转接到试管斜面培养基上培养，得斜面菌种；

(2)平板种子培养：

马铃薯去皮，切成小块，加水煮沸，过滤得马铃薯滤液；在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂，自来水定容，灭菌，得马铃薯培养基；将马铃薯培养基倒平板，冷却后将第(1)部分培养的斜面菌种转接到种子培养基中培养，得种子平板；

2)发酵培养

马铃薯去皮，切成小块，加水煮沸，过滤得马铃薯滤液；在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂，自来水定容，灭菌，得马铃薯培养基作为发酵培养基，将发酵培养基倒平板，待冷却后将步骤1)第(2)部分得到的种子平板上的菌种转接到发酵培养基中发酵培养，得发酵物；

3)提取革耳氯烯酮类化合物

将步骤2)得到的发酵物切成小块，用混合有机溶剂浸提，合并提取液，减压浓缩至干，甲醇溶解过滤，滤液减压浓缩至干得浸膏，在浸膏中加入蒸馏水，再用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相并加压浓缩得到含有革耳氯烯酮的粗提物；

4)精制革耳氯烯酮A和革耳氯烯酮B

将步骤3)得到的含有革耳氯烯酮的粗提物加到反相中压液相柱上，甲醇/水梯度洗脱得组分1和组分2，将组分1经过两次硅胶层析柱，得到革耳氯烯酮A；将组分2经过两次硅胶柱层析和一次凝胶层析，得到革耳氯烯酮B。

4.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)第(1)和(2)部分中，所述加水煮沸的时间为20～40min；所述葡萄糖与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(10～20)，所述琼脂与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(15～20)。

5.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)第(1)和(2)部分中，所述灭菌的条件为121℃下灭菌20min；斜面培养基上培养和种子培养基中培养的条件均为23～30℃下培养3～7d。

6.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述加水煮沸的时间为20～40min；所述葡萄糖与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(10～20)，所述琼脂与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(15～20)；所述灭菌的条件可为121℃下灭菌20min；所述发酵培养的条件可为23～30℃下培养10～18d。

7.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述混合有机溶剂采用乙酸乙酯/甲醇/乙酸，乙酸乙酯、甲醇、甲酸的体积比为80∶15∶5。

8.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述甲醇/水梯度洗脱的比例变化按体积比为0/100到100/0；所述将组分1经过两次硅胶层析柱可分别采用反相硅胶和正相硅胶，正相硅胶柱层析使用的有机溶剂是石油醚/乙酸乙酯，石油醚与乙酸乙酯的体积比可为3∶1；所述将组分2经过两次硅胶柱层析可分别采用正相硅胶和反相硅胶，正相硅胶柱层析使用的有机溶剂是石油醚/乙酸乙酯，石油醚与乙酸乙酯的体积比可为3∶1，所述一次凝胶柱层析可采用LH-20，有机溶剂为甲醇。