[发明专利]革耳氯烯酮类化合物及其制备方法和应用有效
申请号: | 201510061413.5 | 申请日: | 2015-02-06 |
公开(公告)号: | CN104593275B | 公开(公告)日: | 2017-04-12 |
发明(设计)人: | 邓贤明;徐庆妍;金铃;李小阳;王跃宙;胡志钰;郑忠辉;宋思扬 | 申请(专利权)人: | 厦门大学 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;C07D493/10;C07D493/08;A61P35/00;A61P35/02;C12P17/02;C12P17/18;C12R1/645 |
代理公司: | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙)35200 | 代理人: | 马应森 |
地址: | 361005 *** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 革耳氯烯 酮类 化合物 及其 制备 方法 应用 | ||
1.革耳菌(Panus rudis)F01315,已于2013年8月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏中心登记入册编号:CGMCC No.8151。
2.一种革耳氯烯酮类化合物,其特征在于包括革耳氯烯酮A和革耳氯烯酮B,所述革耳氯烯酮A的分子式为C22H25ClO6,分子量为420.13,手性碳的相对构型为4R、5R、6R、7R、8S、9S、11R、12S、15S,革耳氯烯酮A的结构式为:
所述革耳氯烯酮B的分子式为C23H27ClO6,分子量为434.15,手性碳的相对构型为4R、5R、6R、7R、8S、9S、11R、12S、15R,革耳氯烯酮B的结构式为:
3.如权利要求2所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)种子培养:
(1)斜面种子培养:
马铃薯去皮,切成小块,加水煮沸,过滤得马铃薯滤液;在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂,自来水定容,灭菌,得马铃薯培养基;再制成试管斜面,从保藏的甘油管中挑取菌种转接到试管斜面培养基上培养,得斜面菌种;
(2)平板种子培养:
马铃薯去皮,切成小块,加水煮沸,过滤得马铃薯滤液;在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂,自来水定容,灭菌,得马铃薯培养基;将马铃薯培养基倒平板,冷却后将第(1)部分培养的斜面菌种转接到种子培养基中培养,得种子平板;
2)发酵培养
马铃薯去皮,切成小块,加水煮沸,过滤得马铃薯滤液;在马铃薯滤液中加入葡萄糖和琼脂,自来水定容,灭菌,得马铃薯培养基作为发酵培养基,将发酵培养基倒平板,待冷却后将步骤1)第(2)部分得到的种子平板上的菌种转接到发酵培养基中发酵培养,得发酵物;
3)提取革耳氯烯酮类化合物
将步骤2)得到的发酵物切成小块,用混合有机溶剂浸提,合并提取液,减压浓缩至干,甲醇溶解过滤,滤液减压浓缩至干得浸膏,在浸膏中加入蒸馏水,再用乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯相并加压浓缩得到含有革耳氯烯酮的粗提物;
4)精制革耳氯烯酮A和革耳氯烯酮B
将步骤3)得到的含有革耳氯烯酮的粗提物加到反相中压液相柱上,甲醇/水梯度洗脱得组分1和组分2,将组分1经过两次硅胶层析柱,得到革耳氯烯酮A;将组分2经过两次硅胶柱层析和一次凝胶层析,得到革耳氯烯酮B。
4.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于在步骤1)第(1)和(2)部分中,所述加水煮沸的时间为20~40min;所述葡萄糖与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(10~20),所述琼脂与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(15~20)。
5.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于在步骤1)第(1)和(2)部分中,所述灭菌的条件为121℃下灭菌20min;斜面培养基上培养和种子培养基中培养的条件均为23~30℃下培养3~7d。
6.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于在步骤2)中,所述加水煮沸的时间为20~40min;所述葡萄糖与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(10~20),所述琼脂与马铃薯滤液中的马铃薯的质量比为1∶(15~20);所述灭菌的条件可为121℃下灭菌20min;所述发酵培养的条件可为23~30℃下培养10~18d。
7.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于在步骤3)中,所述混合有机溶剂采用乙酸乙酯/甲醇/乙酸,乙酸乙酯、甲醇、甲酸的体积比为80∶15∶5。
8.如权利要求3所述一种革耳氯烯酮类化合物的制备方法,其特征在于在步骤4)中,所述甲醇/水梯度洗脱的比例变化按体积比为0/100到100/0;所述将组分1经过两次硅胶层析柱可分别采用反相硅胶和正相硅胶,正相硅胶柱层析使用的有机溶剂是石油醚/乙酸乙酯,石油醚与乙酸乙酯的体积比可为3∶1;所述将组分2经过两次硅胶柱层析可分别采用正相硅胶和反相硅胶,正相硅胶柱层析使用的有机溶剂是石油醚/乙酸乙酯,石油醚与乙酸乙酯的体积比可为3∶1,所述一次凝胶柱层析可采用LH-20,有机溶剂为甲醇。
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