[发明专利]MSX3基因特异诱导小胶质细胞选择性极化的方法及其应用

权利要求书

1.MSX3基因在制备治疗脱髓鞘疾病药物中的应用，所述的MSX3基因的序列如SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:7所示。

2.根据权利要求1所述的MSX3基因在制备治疗脱髓鞘疾病药物中的应用，其特征在于，其中所述脱髓鞘疾病是指多发性硬化。

3.MSX3基因在促进小胶质细胞转为M2极化状态中的应用，所述的MSX3基因的序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示。

4.根据权利要求3所述的MSX3基因在促进小胶质细胞转为M2极化状态中的应用，其特征在于，所述的应用为一种促进小胶质细胞转为M2极化状态的方法，具体步骤为：

A、构建MSX3过表达型慢病毒

设计并合成引物如下：

P1如SEQ ID NO:1所示；

P2如SEQ ID NO:2所示；

以小鼠小胶质细胞总RNA为模板，通过RT-PCR扩增，制备MSX3 cDNA，MSX3 cDNA的序列如SEQ ID NO:3所示；

对获得的MSX3 cDNA和慢病毒载体进行酶切；构建含MSX3基因的慢病毒；

B、将步骤A获得的慢病毒转染小胶质细胞，获得MSX3高表达的功能性小胶质细胞。

5.根据权利要求4所述的MSX3基因在促进小胶质细胞转为M2极化状态中的应用，其特征在于，其中的步骤A中采用PCR方法从小鼠小胶质细胞总RNA中钓取目的基因获得线性化模板；

使用Age I对获得的MSX3线性化模板进行酶切；

PCR产物交换进入线性化慢病毒载体，制备过表达MSX3的慢病毒MSX3-GFP；

MSX3-GFP慢病毒转染小鼠或人小胶质细胞。

6.根据权利要求4所述的MSX3基因在促进小胶质细胞转为M2极化状态中的应用，其特征在于，其中步骤B的具体步骤为：

实验前一天接种1×10⁵个小胶质细胞于24孔培养板中，所加培养基体积为500μL，细胞的融合率为30～50％；

先将三个不同梯度的病毒加到各组的相应孔中，加入的病毒量分别为1×10⁵TU，1×10⁶TU，5×10⁶TU，三个孔的感染系数分别为1、10、50；

每孔中加入10μL的Polybrene稀释液；

在水平方向轻轻晃动培养板，使培养基和病毒等试剂充分混匀，然后把细胞板放回培养箱孵育；

培养8～12h以后观察细胞状态，弃去细胞上清，更换为新鲜培养基；

感染3～4天后，观察荧光表达情况；对于生长缓慢代谢慢的细胞，延长观察时间，中途换液，保持细胞的活性；

选择MOI值>10的M2极化状态的细胞。

7.一种促进小胶质细胞转为M2极化状态的方法，该方法包括但不限于：

A、构建MSX3过表达的慢病毒；

设计并合成引物如下：

P1：SEQ ID NO:1

P2：SEQ ID NO:2；

以小鼠小胶质细胞总RNA为模板，通过RT-PCR扩增，制备MSX3 cDNA，MSX3 cDNA的序列如SEQ ID NO:3所示；

对获得的MSX3 cDNA和慢病毒载体进行酶切；构建含MSX3基因的慢病毒；

B、将步骤A获得的慢病毒转染小胶质细胞，获得MSX3高表达的功能性小胶质细胞。

8.权利要求7所述的促进小胶质细胞转为M2极化状态的方法在制备在治疗多发性硬化疾病药物中的应用。

9.权利要求7所述的促进小胶质细胞转为M2极化状态的方法得到的功能性小胶质细胞。

10.权利要求9所述的功能性小胶质细胞在制备治疗脱髓鞘疾病中的应用。