[发明专利]一种固定化转氨酶及其在合成西他列汀中间体中的应用

权利要求书

1.一种固定化转氨酶，其特征是将重组转氨酶固定于海藻酸钠上得到的；其中所述重组转氨酶是带有组氨酸标签的来源于分支杆菌(Mycobacterium vanbaalenii)PYR-1的转氨酶，所述来源于分支杆菌PYR-1的转氨酶由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码。

2.权利要求1所述的固定化转氨酶的制备方法，其特征在于：将表达所述重组转氨酶的工程菌细胞与5倍质量的水高压均质，破胞得到粗酶液；将粗酶液与海藻酸钠混合均匀，加入1％(v/v)的戊二醛，摇床震荡30分钟，然后静置3小时，得到混合溶液；将该混合溶液滴入2％(w/v)的氯化钙溶液中形成凝胶小球，过滤洗涤得到固定化转氨酶。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，在粗酶液中加入1.5％(w/v)的海藻酸钠。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，所述洗涤步骤为用0.9％(w/v)的氯化钠溶液洗涤2遍。

5.权利要求1所述的固定化转氨酶在催化前手性羰基化合物进行不对称转氨反应形成光学活性手性胺中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其中所述的前手性羰基化合物选自以下化合物：

其中，R选自

(1)烷氧基；

(2)芳氧基；或

(3)其中，

X选自(1)N，和(2)CR2；

R1和R2独立地选自：

(1)H；

(2)CN；

(3)直链或支链且未被取代或被1～5个卤素原子取代的C1-C10烷基。

7.根据权利要求6所述的应用，其中R为碳链长度为1～8的烷氧基、苄基或

8.根据权利要求7所述的应用，其中R为-O-CH₃、-O-CH₂CH₃或

9.根据权利要求5-8任一项所述的应用，其包括在pH 7.0～10.0的磷酸-磷酸钠缓冲溶液中，在5％(v/v)～50％(v/v)乙醇、20～100g/L的异丙胺和0.1～1.0mmol/L磷酸吡哆醛(PLP)的存在下，50～300g/L所述固定化转氨酶催化10～60g/L的所述前手性羰基化合物进行不对称转氨反应，形成光学活性手性胺。