[发明专利]一种基于免疫金的电化学传感元件的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：

(1)用0.1mol/L NaOH和0.1mol/L HNO₃分别淋洗金电极三次，每次1min，再置于新鲜配制的piranha溶液，浸泡30min；

(2)取出金电极，超纯水淋洗1min，置于超纯水中超声清洗3min，无水乙醇中超声清洗3min，重复3次；

(3)依次用0.3μm和0.05μmAl₂O₃粉末抛光至呈镜面后，金电极置于piranha溶液，浸泡30min，重复步骤(2)，然后用高纯氮吹干金电极表面；

(4)把金电极浸于三巯基丙酸溶液中温育12h，依次用超纯水、无水乙醇淋洗三次，每次1min，然后用高纯氮吹干金电极表面，即为MPA/金电极，然后将金电极浸于碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀亚胺溶液的混合液中12h后，用超纯水淋洗3min，再将金电极浸于含有免疫金的磷酸缓冲液中，4℃过夜，最后用超纯水清洗，高纯氮吹干金电极表面，即为免疫金/MPA/金电极。

2.如权利要求1所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(3)中，所述的piranha溶液是由30wt％的H₂O₂和浓硫酸组成，两者的体积比为1:3。

3.如权利要求1所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的三巯基丙酸溶液的浓度为0.1mol/L。

4.如权利要求1所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀亚胺溶液的浓度均为0.1mol/L，混合液中两者的体积比为1:1。

5.如权利要求1所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的磷酸缓冲液的pH为7.4。

6.如权利要求1所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的免疫金的制备方法如下：

(a)胶体金的制备

将所用器皿用酸液浸泡72h，取出，自来水冲洗，蒸馏水浸泡24h,干燥，用含5wt％的二氯二甲基硅烷的三氯甲烷溶液进行硅化，硅化完成后用双蒸水冲洗，烘干，取质量浓度0.01％氯金酸水溶液100mL加热至沸，300rpm搅拌下加入预热的质量浓度1％柠檬酸三钠水溶液4mL，金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为灰色，然后由灰色变为酒红色，继续搅拌煮沸，直至溶液呈透亮的红色，冷却后用双蒸水定容至100mL，4℃冰箱中避光保存；

(b)免疫金的制备

将步骤(a)制备的胶体金和硝基咪唑抗体溶液分别以0.1Mol/L K₂CO₃调pH至9.0，电磁搅拌硝基咪唑抗体溶液溶液，加入胶体金溶液，继续搅拌10min，加入5wt％BSA使溶液终浓度为1wt％，以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀，用15000r/min离心30min，轻吸上清液，沉淀用含1wt％PEG的PBS缓冲液悬浮，恢复原体积后再离心，如此洗涤2～4次，以彻底除去未结合的蛋白质，最终用含1wt％PEG的PBS缓冲液悬浮并保存。

7.如权利要求6所述的基于免疫金的电化学传感元件的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，所述的PBS缓冲液的量为0.01M,pH为7.4。