[发明专利]甲状腺微粒体抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体涉及一种用于检测甲状腺微粒体抗体的化学发光免疫检测试剂盒。本发明还涉及该试剂盒的制备方法，以及使用该试剂盒检测甲状腺微粒体抗体浓度的方法。

背景技术

甲状腺微粒体抗体(TMA)是针对甲状腺微粒体(TM)的一种抗体，是由自身免疫甲状腺疾病所引起的自身抗体之一。TAM和抗甲状腺球蛋白抗体(TGA)已公认是甲状腺自身免疫过程中的重要标志，是最具代表性的抗体。TAM和TGA在自身免疫性甲状腺疾病的诊断方面是不可或缺的指标，是组织学诊断自身免疫性甲状腺疾病的特定手段之一。

针对各种甲状腺疾病，抗TM阳性检出率：桥本甲状腺炎为50％～100％；甲状腺功能减低症为88.9％；甲状腺肿瘤为13.1％；单纯性甲状腺肿为8.6％；亚急性甲状腺炎为17.2％～25％；系统性红斑狼疮(SLE)为15.4％～44.7％；其他风湿病为30％。正常人也有8.4％的抗TM阳性率。

对于自身免疫性甲状腺炎(即Graves病)患者，其血清TMA水平显著高于正常人及其他非自身免疫性甲状腺疾病患者。因此，TMA水平对鉴别诊断自身免疫性甲状腺炎有重要价值，二者联合应用其诊断准确率可达98％。

桥本氏甲状腺炎、原发性甲减及甲亢等免疫性疾病患者的血清TMA水平也显著高于正常人，尤其桥本氏甲状腺炎更为突出，因此血清TMA水平是诊断此类疾病的“特异指标”。

具体地，对于一些具体甲状腺疾病，血清TMA水平特征如下。①甲亢：TMA表现强阳性，抗体水平高于桥本氏甲状腺炎；部分患者治疗后TMA可转为阴性，但多数临床治愈的甲亢患者TMA长期测定为弱阳性；因此应定期复查甲状腺功能，以防复发。②桥本氏甲状腺炎、阿狄森氏病：TMA表现强阳性；亚甲炎患者TMA明显高于正常人，低于桥本氏甲状腺炎。③原发性甲低症：TMA表现阳性，但继发性甲低症呈TMA阴性，可以此鉴别继发性甲低。④甲状腺癌：TMA增高明显。⑤孕期自身免疫疾病：TMA可增高。

目前，临床上测定TMA的方法主要有酶联免疫法，化学发光免疫分析法等。然而，酶联免疫法存在诸多不足，传统的酶联免疫法方法检测时间长，同时主要依靠纯手工加样等系列繁琐操作，效率低，容易导致实验结果误差大；由于酶促反应不够彻底，且易受外部干扰因素影响，如温度、时间及材料浓度等影响，因此检测时特异性低，灵敏度差，检测范围窄。化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是目前为止最灵敏的免疫测定技术。然而，目前用于化学发光免疫分析法检测TMA的具有优良性能的检测试剂盒并不多见。因此，本领域仍亟需一种在用于检测TMA时能够获得高灵敏度和准确性，操作更加简便，还能够借助分析仪器实现检测过程全自动化的检测TMA的检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测TMA的化学发光免疫检测试剂盒，以获得高的检测灵敏度和准确性。该试剂盒还能提高检测试剂的稳定性，延长检测试剂的保存时间。

本发明还提供用于检测TMA的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。

另外，本发明还提供了根据本发明提供的TMA化学发光免疫检测试剂盒的应用。尤其是采用所述试剂盒，通过全自动化学发光法进行TMA检测的方法，能够减少操作时间，降低人为操作误差，同时利用化学示踪标记物的特异性，提高检测灵敏度。

根据本发明，提供了一种用于检测甲状腺微粒体抗体的化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括标记有示踪标记物的蛋白A或标记有示踪标记物的抗人IgG和抗人IgM，以及包被磁球的甲状腺微粒体抗原或包被磁球的甲状腺微粒体抗原与蛋白载体的连接物。其中，所述示踪标记物直接或间接标记蛋白A，或直接或间接标记抗人IgG和抗人IgM；所述甲状腺微粒体抗原或甲状腺微粒体抗原与蛋白载体的连接物直接或间接包被磁球。

蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体(主要是IgG)的Fc区结合。因而，将蛋白A与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。抗IgG的Fab片段(抗原结合片段)能与IgG抗体的Fc片段(结晶片段)结合。抗IgM的Fab片段(抗原结合片段)能与IgM抗体的Fc片段(结晶片段)结合。