[发明专利]一种金属离子固定化亲和磁球的制备方法及应用

权利要求书

1.一种金属离子固定化亲和磁球的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

第一、2.0～3.0g的三氯化铁和90～110mL的乙二醇和7.0～7.5g的无水乙酸钠进行均匀混合，在150～250℃进行高温水解反应，得到四氧化三铁磁球；

第二、将200～250mg四氧化三铁磁球分散在体积比为1∶4～1∶6的乙醇和水的混合溶液中，逐滴加入0.3～0.5mL的3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基甲基丙烯酸酯机械搅拌1～2天，得到聚合物包裹的磁球；

第三、将步骤二中得的聚合物包裹的磁球分散在40～50mL的乙腈中，加入200μL的烯丙基氯单体和300～350μL二甲基丙烯酸乙二醇酯的交联剂及10～15mg偶氮二异丁腈引发剂于90～100℃进行回流反应，得到以具有以四氧化三铁为核，双层有机聚合物包裹的核-壳-壳结构的磁球；

第四、将步骤三中得的双层有机聚合物包裹的核-壳-壳结构的磁球分散在40～50mL的1∶1～1∶5的三氯甲烷与三乙胺的混合溶液中，加入200～300mg的亚氨基乙二酸于70～90℃进行回流反应，得到以亚氨基乙二酸进行结构修饰的磁球；

第五、将步骤四中得到的亚氨基乙二酸进行结构修饰的磁球加入含有0.05～2mol/L的可溶性铜、镍、钛离子溶液中，用氢氧化钠溶液将溶液pH值调整为6～9，在室温下实现金属离子的固定化，得到螯合金属离子的磁性微球。

2.一种特异性多肽或者蛋白的富集检测方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)将制得的螯合金属离子的磁球用水溶液进行清洗1～3次，去除游离的金属离子；

(2)将步骤(1)清洗后的螯合金属离子的磁球与0.4～0.6mg/L蛋白质溶液进行混合1～2h，利用磁分离对与金属离子特异性作用的多肽或者蛋白进行选择性富集和快速分离，实现对高丰度的多肽或蛋白进行去除和低丰度的多肽或蛋白的富集；

(3)将步骤(2)中吸附多肽或蛋白的磁球用0.2～0.4g/mL的咪唑溶液进行洗脱，用于检测。