[发明专利]一种大菱鲆同质雌核发育鱼苗的诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及染色体操作技术，具体地说是一种大菱鲆同质雌核发育鱼苗的诱导方法。

背景技术

大菱鲆(Scophthalmus maximus)属于菱鲆科(Scophthalmidae)、菱鲆属(Scophthalmus)，其生长快，自1992年自欧洲引入之后发展十分迅速，目前已经成为我国北方主要的海水养殖品种，养殖工艺和产业链也相对完善，每年的总产量超过10万吨，形成了颇具规模的产业。但是，近年来大菱鲆养殖业由于累代养殖和近亲交配，造成种质严重退化。因此采取有效方法，对大菱鲆进行遗传改良，获得良种已成当务之急。杂交是进行品种改良最有效的方法之一。通过不同品系的杂交，可以获得性状优良的品种。纯系是进行杂交育种的必需材料，而采用传统的方法获得近交纯系，往往要连续7-8代甚至十几代的近交选育。对于最低性成熟年龄2-3龄的海水养殖鱼类，就需要十几甚至几十多年的时间。由于时间过长，资金花费和养殖技术难度均较大，传统的培育纯系方法往往使人望而却步。雌核发育是单性生殖的一种，用遗传物质灭活的精子，激活卵子受精发育，随后通过抑制第二极体释放或者抑制早期卵裂使其恢复二倍体倍性，分别得到异质雌核发育二倍体及同质雌核发育二倍体，两者子代的遗传物质完全来自雌核，纯化度高，特别是后者的两套染色体几乎完全相同，仅需1-2代就可得到稳定的纯系，从而极大缩短了育种周期。因此，开展大菱鲆同质雌核发育诱导和培育研究，对于大菱鲆良种培育及其养殖业健康可持续发展是非常必要的；同时，也可以为其他鱼类同质雌核发育人工诱导方法的优化提供有益参考。

人工诱导鱼类同质雌核发育首先需要对精液进行灭活，由于大菱鲆精液浓度较低，活力较差，易在灭活过程中死亡，会导致受精率的下降。同时，同质雌核发育常采用静水压抑制卵裂获得，其诱导的成功率主要受处理时刻(处理起始的时间)、处理压力和处理时间(处理延续的时间)三个因素的影响。静水压处理过程中不合适的处理条件会导致受精卵加倍不完全形成非整倍体，或造成受精卵的损伤，也导致同质雌核发育鱼苗成活率下降。以上两点使得人工诱导大菱鲆同质雌核发育鱼苗具有很大的难度。目前，人工诱导同质雌核发育在鱼类中应用还较少。海水鱼类中仅在真鲷、欧鲈、大黄鱼、牙鲆中有过研究，而在大菱鲆中尚未见报道。由于不同鱼种最适的处理条件往往会有很大的差别，利用上述鱼种同质雌核发育诱导条件无法成功进行大菱鲆同质雌核发育二倍体诱导，从而制约了其应用。因此，对大菱鲆同质雌核发育诱导条件进行优化和明确是十分重要的。

发明内容

本发明目的在于提供一种大菱鲆同质雌核发育鱼苗的诱导方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种大菱鲆同质雌核发育鱼苗的诱导方法，

1)大菱鲆精液灭活及人工受精：

取精液与卵子按体积比1:100-200比例进行授精，作为对照组；

另取精液用预冷的Ringer氏液稀释5-15倍，用剂量为36,000erg mm^-2的紫外线将精子灭活，取灭活后的精液与卵子按体积比1:10-20比例进行授精，作为诱导组；

2)染色体诱导加倍

以对照组受精卵出现第一次卵裂痕的时间作为诱导组受精卵出现第一次卵裂痕的时间，在诱导组第一次卵裂痕出现前10-20min，将步骤1)诱导组受精卵置于静水压机加压容器内，在55-75MPa静水压下进行压力休克处理，处理6～8min后泄压，取出受精卵，置于海水中继续培育。

所述步骤1)中大菱鲆精液和卵子分别为选择性成熟的大菱鲆亲鱼，分别收集精液和卵，镜检其质量后，待用；其中，精进行镜检，选择精子活力高于IV级的精液；卵进行镜检，选择圆球形，无色透明，油球集中的卵子。

所述对照组为取精液用新鲜海水激活后，迅速与卵子按体积比1:100-200混合均匀，随后补入卵子体积1-5倍量的新鲜海水进行授精，授精后将受精卵用新鲜海水冲洗干净，置于卵子体积5-10倍量的新鲜海水中培育，受精后30min内再补加受精卵体积的10-15倍量新鲜海水，作为对照组；

所述诱导组为取精液用预冷的Ringer氏液稀释5-15倍，用剂量为36,000erg mm^-2的紫外线将精子灭活，待对照组人工受精15～25min后，灭活后的精液用新鲜海水激活，迅速与卵子按体积比1:10-20比例混合均匀，随后补入卵子体积1-5倍量的新鲜海水进行授精，授精后将受精卵用新鲜海水冲洗干净，置于卵子体积5-10倍量的新鲜海水中培育，受精后30min内再补入卵子体积10-15倍量的新鲜海水，作为诱导组。