[发明专利]一种全细胞催化合成香草醛的方法有效
申请号: | 201510071566.8 | 申请日: | 2015-02-11 |
公开(公告)号: | CN104805135B | 公开(公告)日: | 2018-11-09 |
发明(设计)人: | 杨缜;杨桃香 | 申请(专利权)人: | 深圳大学 |
主分类号: | C12P7/24 | 分类号: | C12P7/24 |
代理公司: | 深圳市君胜知识产权代理事务所(普通合伙) 44268 | 代理人: | 王永文;刘文求 |
地址: | 518060 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞 催化 合成 香草 方法 | ||
1.一种全细胞催化合成香草醛的方法,其特征在于,包括步骤:
S1、将保存的菌株CGMCC1347接入种子培养基中活化,32~40℃、100~300rpm振荡反应6~36h得到种子液;
S2、反应结束后,取2ml种子液接入30~70ml发酵培养基中,32~40℃、100~300rpm振荡反应12~36h得到菌液;
S3、取10ml菌液3000~6000rpm离心5~20min,弃上清,获得湿菌体;
S4、往湿菌体中加入5~15ml缓冲溶液,重悬菌体并转移至装有0.1~0.5g异丁香酚的锥形瓶中,盖上橡胶塞,25~35℃、100~300rpm振荡反应48~96h;
S5、反应结束后,加入5~15ml95%乙醇以终止反应,沉淀蛋白并溶解底物和产物,充分混匀后5000~8000rpm离心10min;
S6、取离心后的上清液,用乙醇稀释,过滤后得到香草醛;
所述步骤S4中,锥形瓶中还添加有50~150ul离子溶剂;
所述离子溶剂为深度低共熔溶剂;
所述深度低共熔溶剂为胆碱醋酸盐型DESs或胆碱氯盐型DESs;
所述胆碱醋酸盐型DESs为ChAc/U、ChAc/A、ChAc/G或ChAc/EG;
所述胆碱氯盐型DESs为ChCl/U、ChCl/A、ChCl/G或ChCl/EG。
2.根据权利要求1所述的全细胞催化合成香草醛的方法,其特征在于,所述步骤S4中,锥形瓶中还添加有无机氮源;
所述无机氮源为尿素。
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