[发明专利]一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法在审
| 申请号： | 201510075572.0 | 申请日： | 2015-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN104651508A | 公开（公告）日： | 2015-05-27 |
| 发明（设计）人： | 张卫东;廖力;王岚;权永兵;徐淼锋;迟远丽;蒋立琴 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谭志强 |
| 地址： | 519015 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 coii 基因 南亚 乳白 荧光 定量 pcr 分子 检测 方法 | ||
1.一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，采用了上游引物CT-F、下游引物CT-R、引物探针CT-TZ，其序列分别如下：
CT-F：5’-AACCGAGTCGTTTTACCAACAA-3’；
CT-R：5’-TACTCCAAGTCTTGGGATTGTT-3’；
CT-TZ：5’-FAM-CTAATCGTCACAGCAGCAGATGTT-TAMRA-3’，其中FAM为荧光报告基团，TRAMA为荧光淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)提取基因组DNA制备模板；
2)将所述上游引物CT-F、所述下游引物CT-R和所述荧光探针CT-TZ置于荧光定量PCR仪中进行实时定量荧光PCR扩增反应；
3)荧光PCR仪读取Ct值判定检测的结果。
3.根据权利要求2所述的一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，PCR反应体系总体积为20μl，各成分组成如下：2×HS Premix混合反应液10μl，上下游引物各0.5μl，荧光探针0.25μl，模板2μl，加ddH2O补足到20μl。
4.根据权利要求2所述的一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，进行PCR扩增的反应条件为：95℃预变性，30s；95℃变性5s，60℃退火延伸30s，45个循环。
5.根据权利要求2所述的一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，所述上游引物CT-F和下游引物CF-R的使用浓度为0.1μmol/L～1.0μmol/L，所述引物探针CT-TZ的使用浓度为0.05μmol/L～0.5μmol/L。
6.根据权利要求2所述的一种基于COII基因的南亚乳白蚁荧光定量PCR分子检测方法，其特征在于，引物探针组合方法的检测灵敏度在1pg/μl。
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