[发明专利]片段缩合制备利拉鲁肽的方法

权利要求书

1.片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，固相合成4个侧链保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到全保护利拉鲁肽直链多肽，脱去第20位Lys的侧链保护，并完成修饰，形成全保护利拉鲁肽，然后裂解脱除保护基得到利拉鲁肽粗肽，纯化换盐得到利拉鲁肽；

其中，所述的4个肽片段序列为：

第一肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第1-8位氨基酸，

第二肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第9-16位氨基酸，

第三肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第17-26位氨基酸，

第四肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第27-31位氨基酸；

所述的方法包括以下步骤：

(1)分别固相合成侧链保护的第一～第四肽片段序列，并从树脂上裂解；

(2)将侧链保护的第四肽片段序列羧基端修饰保护，并脱去其氨基保护基；

(3)将脱去氨基保护基的侧链保护的第四肽片段序列和侧链保护的第三肽片段序列偶联得到侧链保护的第五肽片段序列，并脱去其氨基保护基；

(4)将脱去氨基保护基的侧链保护的第五肽片段序列和侧链保护的第二肽片段序列偶联得到侧链保护的第六肽片段序列，并脱去其氨基保护基；

(5)将脱去氨基保护基的侧链保护的第六肽片段序列和侧链保护的第一肽片段序列偶联得到全保护的利拉鲁肽直链多肽；

(6)将全保护的利拉鲁肽直链多肽脱去第20位Lys的侧链保护，并完成修饰得到全保护利拉鲁肽；

(7)将全保护的利拉鲁肽裂解脱除保护基得到利拉鲁肽粗肽；

(8)利拉鲁肽粗肽经纯化换盐得到利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(1)中，侧链保护的第一至第四肽片段序列分别由氨基酸依次偶联在固相载体上获得；其中，所述的固相载体为酸敏感树脂；

侧链保护的第一至第四肽片段序列固相合成中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；所使用的偶联剂为DIC与HOBt的组合、或者HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；所使用的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1∶2∶7的混合物。

3.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(2)中，所使用的羧基端保护试剂为0.5M的2Cl-Trt Cl的DCM溶液或者CHCl₃与TFE与TBTA按照体积比7∶2∶1的混合物。

4.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)、(4)中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为16％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液。

5.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(3)、(4)、(5)中，所使用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者DIC与HOBt的组合、或者EDC与HOBt的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；偶联反应的溶剂为DMF、DCM、NMP、THF、TFE和DMSO中的任意一种或几种的组合。

6.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(6)中，脱去Lys侧链保护ivDde的试剂为水合肼与DMF按照体积比1∶15的混合物。

7.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(6)中，Lys侧链修饰的方法为先加入Fmoc-Glu-OtBu缩合；然后脱去Fmoc基团，所用试剂为体积百分含量为16％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；最后再与棕榈酸缩合。

8.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(7)中，全保护利拉鲁肽裂解的裂解液为TFA与H₂O按体积比95∶5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhOH与H₂O按体积比80∶5∶5∶5∶5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与H₂O按体积比92.5∶2.5∶2.5∶2.5的混合溶液。

9.根据权利要求1所述的片段缩合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(8)中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐；流动相为醋酸水溶液和乙腈溶液。