[发明专利]片段缩合制备利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及制药领域，具体地说，涉及片段缩合制备利拉鲁肽的方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名liraglutide，是一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，序列为：H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-ɑ-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH，分子式：C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，作为一种皮下注射制剂，能起到良好的降低血糖作用，能够通过降低2型糖尿病患者的空腹及餐后血糖而改善血糖控制，同时能够降低患者体重。

目前利拉鲁肽的合成方法如专利CN102286092、专利CN103145828、专利CN103288951、专利CN103304660和专利CN103980358是利用Fmoc策略固相法依次连接合成利拉鲁肽。该方法氨基酸逐个偶联合成周期长，逐步偶联时树脂收缩严重、反应不完全、产生缺陷肽，固相载体选用的取代值限制，总收率较低，同时杂质较多，纯化困难。

专利CN102875665、专利CN104045705、专利CN104045706、专利CN103275208、专利CN103304659、专利CN103864918和专利CN104004083采用固相片段缩合的方法合成，固相片段缩合投入的每个片段都是1.5-3.5倍过量，严重浪费肽片段，造成合成成本很高；同时固相片段缩合的树脂取代值限制，物料通量降低，浪费溶剂，产生大量废液。

其他专利公开了基因重组生产利拉鲁肽，然而基因表达有着工作量大、三废严重、技术难度大、生产成本高等缺点。

所以本领域技术人员仍然期待以高产品收率、低合成成本获得具有良好品质产品的方法，尤其是降低成本、减少废液产生的新方法，对于大规模、产业化生产是非常必要和重要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有方法合成收率低、生产成本高、产生废液多、产品纯化难、不能低成本高效率得到高纯度的利拉鲁肽的缺点，提供一种片段缩合制备利拉鲁肽的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

片段缩合制备利拉鲁肽的方法，固相合成4个侧链保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到全保护利拉鲁肽直链多肽，脱去第20位Lys的侧链保护，并完成修饰，形成全保护利拉鲁肽，然后裂解脱除保护基得到利拉鲁肽粗肽，纯化换盐得到利拉鲁肽；

其中，所述的4个肽片段序列为：

第一肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第1-8位氨基酸，

第二肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第9-16位氨基酸，

第三肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第17-26位氨基酸，

第四肽片段序列为利拉鲁肽序列中的第27-31位氨基酸。

上述片段缩合制备利拉鲁肽的方法，优选包括以下步骤：

(1)分别固相合成侧链保护的第一～第四肽片段序列，并从树脂上裂解；

(2)将侧链保护的第四肽片段序列羧基端修饰保护，并脱去其氨基保护基；

(3)将脱去氨基保护基的侧链保护的第四肽片段序列和侧链保护的第三肽片段序列偶联得到侧链保护的第五肽片段序列，并脱去其氨基保护基；

(4)将脱去氨基保护基的侧链保护的第五肽片段序列和侧链保护的第二肽片段序列偶联得到侧链保护的第六肽片段序列，并脱去其氨基保护基；

(5)将脱去氨基保护基的侧链保护的第六肽片段序列和侧链保护的第一肽片段序列偶联得到全保护的利拉鲁肽直链多肽；

(6)将全保护的利拉鲁肽直链多肽脱去第20位Lys的侧链保护，并完成修饰得到全保护利拉鲁肽；

(7)将全保护的利拉鲁肽裂解脱除保护基得到利拉鲁肽粗肽；

(8)利拉鲁肽粗肽经纯化换盐得到利拉鲁肽。

步骤(1)中，侧链保护的第一至第四肽片段序列分别由氨基酸依次偶联在固相载体上获得；其中，所述的固相载体为酸敏感树脂，优选为2-氯-三苯甲基氯树脂。

侧链保护的第一至第四肽片段序列固相合成中，