[发明专利]基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K2的方法

权利要求书

1.基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K₂的方法，包括如下步骤：种子培养、接种培养、发酵培养和静置分层提取维生素K₂，其特征在于：发酵培养过程中，接种培养后的发酵培养基中加入活性成分，所述活性成分由以下组分组成：10g/L-60g/L表面活性剂、5g/L-40g/L甘油和100g/L-250g/L植物油。

2.根据权利要求1所述的一种基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K₂的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)种子培养，从保存斜面上取一环黄杆菌接种于含有50-150mL种子培养基的500mL三角瓶中，在温度为30-37℃条件下，以转速100-200rpm振荡培养24-48h；

所述种子培养基由以下组分组成：1-5g/L葡萄糖、2-10g/L甘油、10-20g/L蛋白胨、1.5-4g/L酵母提取物、1-4g/L K₂HPO₄、1-3g/L NaCl和0.1-1g/L MgSO₄·7H₂O；

(2)接种培养，按接种量5％-10％接入发酵罐中的发酵培养基中，在培养温度30-37℃、条件下，以转速100-200rpm、通气量0.5-1vvm搅拌培养24-36小时；

所述发酵培养基由以下组分组成：5-30g/L黄豆粉、0-10g/L葡萄糖、10-20g/L蛋白胨、3-10g/L酵母提取物、1-3g/L K₂HPO₄、1-4g/L NaCl、0.1-1g/L MgSO₄·7H₂O；

(3)发酵培养，将接种培养后的发酵培养基中加入活性成分，所述活性成分由以下组分组成：10g/L-60g/L表面活性剂，5g/L-40g/L甘油，100g/L-250g/L植物油，且搅拌速率500-800rpm，通气量1.5-3vvm搅拌，形成水包油微乳，发酵培养72-96小时；

(4)静置分层提取，将经步骤(3)发酵培养的混合物停止搅拌，静置3-5小时分层后，提取上层植物油，油相中含有总维生素K2。

3.根据权利要求2所述的基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K₂的方法，其特征在于：上述步骤(3)中表面活性剂选自蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯-80、聚辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种。

4.根据权利要求2或3所述的基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K₂的方法，其特征在于：上述步骤(3)中植物油选自大豆油，玉米油，花生油，橄榄油、山茶油等中的一种或几种。

5.根据权利要求2所述的基于利用黄杆菌原位发酵分离偶联合成维生素K₂的方法，其特征在于：步骤(3)发酵培养过程中，在发酵罐中加入50g/L蔗糖脂肪酸酯，10g/L甘油，150g/L大豆油，搅拌速率600rpm，通气量2vvm，形成水包油微乳，发酵培养96小时。