[发明专利]一种用于测量从活的生物细胞跨细胞膜转运被分析物的方法

说明书

本发明提供用于测量从活的生物细胞跨细胞膜转运被分析物的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供一种或多种表达多个离子通道的活的生物细胞，所述细胞载有被分析物；b)从所述细胞穿过离子通道卸载至少部分所述被分析物；c)使用x‑射线荧光测量所述被分析物，其中所述x‑射线荧光测量使用了装配有微聚集X‑射线管的能量色散x‑射线荧光分光仪。

本申请为国际申请日2009年7月1日、国际申请号 PCT/US2009/049444于2011年1月4日进入中国国家阶段、申请号 200980125952.3、发明名称“用于测量被分析物跨屏障转运的方法和装置”的分案申请。

相关申请/要求优先权

本申请涉及并要求2008年7月1日提交的名称为用于测量化学物质跨细胞膜转运的免标记测定法的临时申请No.US61/133,697；以及 2009年2月20日提交的名称为用于测量跨膜转运的方法和装置的临时申请No.US61/208,115的优先权；并且这些临时申请并入本文作为参考。

政府的权利

本发明根据美国国立卫生研究院授予的合同号1R43GM080781-01 在美国政府的支持下进行。美国政府享有本发明的某些权利。

技术领域

本发明涉及用于测量跨膜转运率的方法和装置。

背景技术

对潜在重要药物的鉴定常常需要测量这些药物对离子跨膜转运的影响。例如，一些药物所产生的危及生命的毒性与心脏复极化延迟或与离子的迁移有关的QT间期延长有关。例如，近来有数种药物退市的原因就是其对细胞膜转运系统有影响。

离子通道是无所不在的允许离子跨细胞膜转运的成孔蛋白。离子通道促进特定离子种类(例如，Na⁺，K⁺，Ca²⁺，Cl^-)在细胞小室之间和/或跨过具有不同离子选择性的外部细胞膜的迁移。离子通道为动态结构，其对外界因素，如电压梯度，配体和机械力产生应答。制药工业开发出了改变离子通道功能的治疗法。例子包括抗癫痫剂，如钠离子通道阻滞剂卡马西平，抗高血压剂二氢吡啶类钙通道阻滞剂(络活喜)和用于糖尿病的磺脲类钾通道开放剂(亚莫利)。近来，离子通道靶向药物的总年销售额为200亿美元。

对于药物开发，离子通道是较难的分子靶点。困难缘于适宜高通量筛选分析形式的缺乏，离子通道生物物理学的复杂性，以及药物的潜在结合位点和结合模式的范围。

对用于测量离子的跨膜转运率的更简单方法的需求仍然存在。

因此，本发明的目的在于提供用于测量离子的跨膜转运率的方法和装置。

本发明的其它目的，优点和新特征一部分将在下面的描述中提及，一部分对本领域技术人员而言可以通过研究下文而变得显而易见，或者通过本发明的实施来获悉。本发明的目的和优点可以通过权利要求书中特别指出的仪器和组合物来了解和获得。

附图简述

合并入并形成说明书的一部分的附图说明了本发明的实施方案，并与描述一起起到解释本发明的原则的作用。在图中：

图1显示了本发明的方法的流程图；

图2显示了本发明的方法的另一流程图；

图3显示了本发明的装置的示意图；

图4显示了本发明的装置的另一示意图；

图5显示了水中x射线的1/e衰减深度计算值的曲线

图6显示了一组铷流出率数据。

图7显示了铷流出率对抑制剂浓度的曲线。

图8显示了本发明的装置的示意图。