[发明专利]一种凹叶厚朴再生体系构建的方法

权利要求书

1.一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

 （1）无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的种凹叶厚朴种子，在自来水下初步清洗干净,种子以0.1%～0.5%高锰酸钾溶液浸泡2～5h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒1～5min，无菌水冲洗4～5次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养；

（2）初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，30～40天转接一次；

（3）丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为1.5～2.0cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，30～40天转接一次；

（4）丛生芽壮苗培养：将丛生芽增殖得到的不定芽，切除基部少量愈伤组织，去除底部叶片后接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，30～40天转接一次；

（5）试管苗生根：将长至1.5～2.0cm的,叶片数不少于3片，植株较健壮的无根苗分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；

（6）试管苗驯化移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥（1：1）混合成的基质中并定植于大田中。

2.根据权利要求1所述的一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于步骤（1）所述的萌发培养基为：3/4B₅ + 0.1～0.5mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/L NAA +2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于步骤（2）所述的初代培养基为：B₅+1～4mg/L 6-BA+1～1.5mg/L 2,4-D+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1～2mg/L KT+1～1mg/L NAA+1～3mg/L 6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于步骤（4）所述的壮苗培养基为MS+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～1mg/L 6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

6.根据权利要求1所述的一种凹叶厚朴再生体系构建的方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为1/2MS+0.1～0.5mg/L NAA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。