[发明专利]一种能够降解*的功能蛋白

权利要求书

1.一种能够降解的功能蛋白，其特征在于，该功能蛋白由人苍白杆菌Ochrobactrumanthropi DW1的菌液经过提取与纯化得到的，人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1的菌种保藏号为CGMCC NO.8621，其中，从人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1中分离能够降解的功能蛋白具体方案为：

①向加入198ml诱导培养基、2.0ml微量金属液和0.2ml维生素c溶液的培养瓶内接种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的菌株人苍白杆菌Ochrobactrumanthropi DW1；然后用透气膜密封瓶口，将培养瓶在培养温度为25～28℃、转速为100r/min的振荡器中培养40d后即可得到扩增培养后的菌液；

②将步骤①中的菌液进行超声波破碎15min；破碎后的菌液在8000r/min条件下离心15min，分离出菌体和上清液；

③向由步骤②分离出的菌体中加入30ml去离子水，继续进行超声波破碎15min，在8000r/min条件下离心15min，分离出菌体和上清液；

④向由步骤③分离出的菌体中加入30ml去离子水，继续进行超声波破碎15min，在8000r/min条件下离心15min，分离出菌体和上清液；

⑤合并由步骤②、③和④所收集的上清液，即可得到功能蛋白粗提液；

⑥向由步骤⑤得到的功能蛋白粗提液中加入碾细的(NH₄)₂SO₄固体至65～70％饱和度，在转速为100r/min的振荡器中振荡1～2h，然后在8000r/min条件下离心15min，分离出沉淀；

⑦将由步骤⑥得到的沉淀溶于5ml pH值为7.0～7.2的0.05mol/L三羟基甲基氨基甲烷-HCl缓冲液并装入透析袋中，将透析袋在pH值为7.0～7.2的0.05mol/L三羟基甲基氨基甲烷-HCl缓冲液中透析24h；将透析后的样品在8000r/min条件下离心15min，分离出上清液；

⑧将由步骤⑦得到的上清液上到已用pH值为7.0～7.2的0.05mol/L三羟基甲基氨基甲烷-HCl缓冲液平衡的Q Sepharose Fast Flow阴离子交换柱上过滤，采用pH值为7.0～7.2内含0.25mol/L氯化钠的0.05mol/L三羟基甲基氨基甲烷-HCl缓冲液线形洗脱梯度洗脱结合的功能蛋白，洗脱速度为20ml/h；运用容积为10ml的试管收集洗脱液，其中每支试管收集洗脱液5ml；用紫外分光光度计在吸收波长为280nm处检测洗脱液，收集吸光度大于0.01的洗脱液；测定功能蛋白的活性，选择活性部分备用；

所述步骤①中诱导培养基的组成为：NaNO₃：2.5g/L，NH₄Cl：1.5g·L^-1，KH₂PO₄：1.5g·L^-1，MgCl₂：0.2g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.15g·L^-1，茚并[1，2，3-cd]芘：0.01g·L^-1；

所述步骤①中微量金属液的组成为：CoCl₂·6H₂O：35mg·L^-1，CuCl₂：0.25mg·L^-1，H₃BO₃：6.0mg·L^-1，MnCl₂·4H₂O：30mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O：3.0mg·L^-1，NiCl₂·2H₂O：2.5mg·L^-1，ZnCl₂：2.5mg·L^-1。