[发明专利]一种能够降解*的功能蛋白

说明书

本发明提供一种能够降解的功能蛋白。所述能够催化降解的功能蛋白由人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1的菌液经过提取与纯化得到的，该人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1的菌种保藏号为CGMCC NO.8621。该功能蛋白在进行催化降解时，适宜pH值为6.0～8.0，最适宜pH值为7.0，当pH值小于4及大于10时容易失活变性，适宜反应温度为30～45℃，最适宜反应温度为35℃，当温度高于50℃易于失活变性，浓度为1mmol/L的Cu²⁺、Ni²⁺、Hg²⁺离子对功能蛋白的活性有较强抑制作用。本发明提供的功能蛋白可以有效催化降解，对于多环芳烃污染土壤及水体有应用潜力。

技术领域

本发明属于生物工程技术与难降解有机污染物生物处理技术领域，特别涉及一种能够降解的功能蛋白。

背景技术

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是一类含有两个或两个以上苯环的有毒有机污染物，具有强烈的致癌作用、致畸作用和致突变作用。PAHs能通过生物累积及食物链的传递作用对生态环境和人体健康造成极大危害，已引起各国环境科学家的高度重视。美国环保局早在80年代就已把16种未带分支的PAHs确定为环境中的优先污染物，我国也把PAHs列入环境污染的黑名单中。

目前对环境中多环芳烃的治理技术主要有物理法、化学法和生物法。物理处理技术主要存在处理费用高与去除不彻底的缺点。在化学法中国内外有学者利用有机溶剂(如乙醇、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮)及表面活性剂等洗脱环境中的多环芳烃，但会存在二次污染等问题。生物法具有操作简单、运行费用低、无二次污染等优点。一般来说，随着多环芳烃苯环数量的增加，其降解速率降低。因此，低分子量的多环芳烃在环境中能较快被降解，在环境中存在的时间较短，而高分子量的多环芳烃，例如苯并[a]芘、等则难于降解，较长期存在于环境中。从降解微生物细胞中提取功能蛋白来强化降解已成为去除多环芳烃污染的一种重要方法。功能蛋白在多环芳烃降解的应用中具有降解效率高、作用底物浓度低及环境适应性强等优点，具有广阔的应用前景。但是，由于对多环芳烃降解微生物缺乏深入的研究，国内外缺少高环多环芳烃功能蛋白方面的研究报道。

发明内容

本发明提供一种能够降解的功能蛋白。所述能够催化降解的功能蛋白由人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1的菌液经过提取与纯化得到的。该功能蛋白在进行催化降解时，适宜pH值为6.0～8.0，最适宜pH值为7.0，当pH值小于4及大于10时容易失活变性，适宜反应温度为30～45℃，最适宜反应温度为35℃，当温度高于50℃易于失活变性，浓度为1mmol/L的Cu²⁺、Ni²⁺、Hg²⁺离子对功能蛋白的活性有较强抑制作用。

分离能够催化降解的功能蛋白所用的菌株人苍白杆菌Ochrobactrum anthropiDW1在2013年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNO.8621。从人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1中分离能够催化降解的功能蛋白具体方案为：

①向加入198ml诱导培养基、2.0ml微量金属液和0.2ml维生素c溶液的培养瓶内接种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的菌株人苍白杆菌Ochrobactrum anthropi DW1；然后用透气膜密封瓶口，将培养瓶在培养温度为25～28℃、转速为100r/min的振荡器中培养40d后即可得到扩增培养后的菌液；

②将步骤①中的菌液进行超声波破碎15min；破碎后的菌液在8000r/min条件下离心15min，分离出菌体和上清液；