[发明专利]乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法

权利要求书

1.乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是，包括以下步骤：在室温条件下，将利妥昔单抗溶液和吲哚菁绿溶液迅速振荡混匀反应；然后移入用半透膜制成的透析袋中，在室温避光条件下浸入灭菌注射用水的透析液中进行透析，连续透析至无吲哚菁绿浸入透析液，收集透析袋中的利妥昔单抗与吲哚菁绿的偶联物，制成吲哚菁绿-利妥昔单抗结合的新型示踪剂。

2.如权利要求1所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：具体包括以下步骤：

(1)分别配制利妥昔单抗溶液和吲哚菁绿溶液；

(2)将吲哚菁绿溶液缓慢滴入利妥昔单抗溶液中，此时形成混合溶液，在室温下迅速振荡混匀反应，从而使大分子利妥昔单抗与小分子吲哚菁绿进行充分的偶联反应；

(3)偶联反应后将装有偶联反应物的离心管进行离心沉淀，观察有无沉淀生成，若有沉淀生成，则去除离心管底部的沉淀后，取上清液置于半透膜制成的透析袋中；若无沉淀生成，则直接将混合液置于半透膜制成的透析袋中；

(4)在室温避光条件下将步骤(3)中的透析袋浸入灭菌注射用水的透析液中，以偶联反应物混合液与灭菌注射用水体积比1:200的比例进行透析，先用流水进行透析5分钟，随后将透析袋置于灭菌注射用水中继续进行透析，每2小时更换透析液，取每次透析结束更换的透析液进行荧光脉管系统成像仪检测，确定偶联物中有无游离的小分子吲哚菁绿，通过此方法能将透析袋中的小分子吲哚菁绿完全洗脱出去，透析12小时后，吲哚菁绿经过偶联反应结合到利妥昔单抗上，然后收集利妥昔单抗与吲哚菁绿的偶联反应物，制成吲哚菁绿-利妥昔单抗结合的新型示踪剂。

3.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(1)中，配制利妥昔单抗溶液的步骤如下：在室温条件下，按照无菌操作原则将100mg利妥昔单抗用10ml灭菌注射用水配制成10mg/ml的溶液，置于50ml无菌离心管内冷藏(2-8℃)，保存备用。

4.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(1)中，配制吲哚菁绿溶液的步骤如下：在室温条件下，将25mg吲哚菁绿用10ml灭菌注射用水配制成浓度为2.5mg/ml的溶液，置于50ml无菌离心管内避光保存备用。

5.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(2)中，吲哚菁绿溶液需在5分钟内完全加入利妥昔单抗溶液，注意避免气泡的产生。

6.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(2)中，利妥昔单抗与吲哚菁绿的偶联反应式如下：

7.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(2)中，采用电磁搅拌器振荡混匀反应，时间为5分钟。

8.如权利要求2所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(2)中，所述混合溶液中利妥昔单抗和吲哚菁绿的质量比为4～32:1，其中，利妥昔单抗的质量浓度为5mg/ml～8.89mg/ml。

9.如权利要求7所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备方法，其特征是：步骤(3)中，所述半透膜的直径为22mm，截留分子量为4000-6000道尔顿。

10.如权利要求1至9任一所述的乳腺癌前哨淋巴结示踪剂的制备方法所制得的偶联反应物吲哚菁绿-利妥昔单抗。