[发明专利]一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法

权利要求书

1.一种猪胚胎成纤维细胞的单细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A：获得猪胚胎成纤维细胞悬液和饲养层细胞；所述猪胚胎成纤维细胞悬液中猪胚胎成纤维细胞的浓度为5~10个/mL；

步骤B：将所述饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿，培养至饲养层细胞密度在微滴内100%汇合，获得饲养层细胞微滴；

步骤C：将所述成纤维细胞悬液接种至具有所述饲养层细胞微滴的培养皿，经细胞培养，获得单细胞克隆；所述成纤维细胞悬液的接种量为10~15mL/皿；所述细胞培养为38℃、5%CO2恒温培养8~11天。

2.根据权利要求1所述的单细胞培养方法，其特征在于，所述饲养层细胞的接种量为300~500μL/微滴。

3.根据权利要求1所述的单细胞培养方法，其特征在于，所述饲养层细胞微滴在培养皿中的密度为10~12个/皿。

4.根据权利要求1所述的单细胞培养方法，其特征在于，步骤B中所述饲养层细胞的培养条件为37℃、5%CO2恒温培养。

5.根据权利要求1所述的单细胞培养方法，其特征在于，所述成纤维细胞为3代以内的成纤维细胞。

6.根据权利要求1所述的单细胞培养方法，其特征在于，所述饲养层细胞的制备方法为：取胚胎成纤维细胞，经丝裂霉素C处理2.5h，去除丝裂霉素C，加入胰酶消化液孵育，终止消化，获得饲养层细胞。