[发明专利]牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法及其活性测定和质谱鉴定有效
| 申请号： | 201510100092.5 | 申请日： | 2015-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN104710526B | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 陈迪;娄维义 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学第二附属中学 |
| 主分类号： | C07K14/815 | 分类号： | C07K14/815;C07K1/16 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭国中;陈少凌 |
| 地址： | 201203 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牛乳 分离 凝血酶 抑制 方法 及其 活性 测定 鉴定 | ||
1.一种从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤一，采用蛋白酶对牛乳进行酶解，对酶解产物进行钝化、离心、透析，得酶解产物混合物；
步骤二，采用Sephadex G-50层析柱对所述酶解产物混合物进行分离纯化，即得凝血酶抑制肽；
所述蛋白酶为Alcalase 2.4L。
2.根据权利要求1所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，步骤一中，所述牛乳选自全脂奶粉。
3.根据权利要求1所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，步骤一中，所述钝化具体指将酶解产物置于100℃加热15min。
4.根据权利要求1所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，步骤一中，所述透析的时间为48h。
5.根据权利要求1所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，步骤一中，所述酶解产物混合物冷冻至干粉，置于-20℃冰箱中备用。
6.根据权利要求1所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，所述方法还包括对步骤二所得凝血酶抑制肽进行抗凝血酶活性测定、LC-ESI-MS鉴定或生物信息学分析。
7.根据权利要求6所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，所述生物信息学分析包括凝血酶抑制肽的分子量、等电点分析，亚细胞定位分析，信号肽分析或功能分析。
8.根据权利要求7所述的从牛乳中分离凝血酶抑制肽的方法，其特征在于，所述亚细胞定位采用软件为PSORTⅡ；信号肽分析采用软件为SignalP 4.1；功能分析采用软件为GO软件。
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