[发明专利]表达精氨酸脱亚胺酶基因的重组大肠杆菌及其应用

权利要求书

1.来源于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)93-11的精氨酸脱亚胺酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述蜡样芽孢杆菌93-11保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2015047。

2.一株表达权利要求1所述精氨酸脱亚胺酶基因的重组大肠杆菌DH5αI2-3，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2015048。

3.权利要求2所述的重组大肠杆菌在生产L-瓜氨酸中的应用。

4.一种L-瓜氨酸的生产方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2015048的重组大肠杆菌DH5αI2-3经种子培养和发酵培养后，离心得到含精氨酸脱亚胺酶的湿菌体；

2)将步骤1)得到的湿菌体加入到精氨酸水溶液中，调节混合溶液pH为6-7，在37-60℃条件下反应0.5-4小时；

3)从反应液中分离纯化L-瓜氨酸。

5.如权利要求4所述的L-瓜氨酸的生产方法，其特征在于：步骤2)中所述混合溶液中精氨酸的浓度为10-300g/L，湿菌体的浓度为0.5-5g/L。

6.如权利要求4所述的L-瓜氨酸的生产方法，其特征在于：所述分离纯化L-瓜氨酸的方法包括以下步骤：

1)微滤：将反应液通过孔径为0.02-1μm的陶瓷微滤膜，得到微滤透析液；

2)超滤：将微滤透析液通过孔径为10-100埃，截留分子为2000-10000的超滤膜，得到超滤透析液；

3)电渗析：将超滤透析液经电渗析分离无机盐；

4)反渗透膜浓缩：将电渗析液经过反渗透膜预浓缩；

5)浓缩、结晶：将反渗透液真空浓缩至波美度为20-30，然后冷却结晶，离心收集结晶，得到一次L-瓜氨酸粗品和母液；

6)母液分离：将母液上离子交换树脂柱，以2-5M氨水洗脱，洗脱液真空浓缩至波美度为20-30，然后冷却结晶，离心收集结晶，得到二次L-瓜氨酸粗品；

7)粗品精制：将一次和二次L-瓜氨酸粗品混合后加入10-100倍重量的纯水溶解，然后加入活性炭脱色，过滤，滤液浓缩至波美度为20-30，冷却结晶，离心收集结晶，干燥得到L-瓜氨酸精制纯品。

7.如权利要求6所述的L-瓜氨酸的生产方法，其特征在于：所述离子交换树脂柱是D001阳离子交换树脂柱。