[发明专利]由XY ES细胞制备能育的XY雌性动物

权利要求书

1.一种增加在F0代中生成胚胎干(ES)细胞衍生的小鼠的效率的方法，其包括：

(a)在培养基中维持供体XY小鼠胚胎干(ES)细胞，所述培养基包含：(i)基础培养基，和(ii)适合于培养物中的小鼠ES细胞生长和维持多能性的补充物，其中所述基础培养基包含浓度为1.5-2.2mg/mL的碳酸氢钠，包含浓度为3.0-6.4mg/mL的氯化钠，包含浓度为4.5-15.5mg/mL的葡萄糖，包含胎牛血清并具有218-322mOsm/kg的摩尔渗透压浓度；

(b)将来自步骤(a)的供体XY小鼠ES细胞注射入桑椹胚前期的宿主胚胎内；

(c)将步骤(b)的宿主胚胎引入受体雌性小鼠并孕育宿主小鼠胚胎；和

(d)获得XY F0小鼠子代。

2.权利要求1的方法，其中所述基础培养基包含3mg/mL氯化钠，2.2mg/mL碳酸氢钠，和4.5mg/mL葡萄糖，并具有218mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

3.权利要求1的方法，其中所述基础培养基含有5.1mg/mL氯化钠，1.5mg/mL碳酸氢钠和4.5mg/mL葡萄糖，并具有261mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

4.权利要求1的方法，其中所述基础培养基含有6.4mg/mL氯化钠，1.5mg/mL碳酸氢钠和4.5mg/mL葡萄糖，并具有294mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

5.权利要求1的方法，其中所述基础培养基含有5.1mg/mL氯化钠，2.2mg/mL碳酸氢钠和4.5mg/mL葡萄糖，并具有270mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

6.权利要求1的方法，其中所述基础培养基含有5.1mg/mL氯化钠、2.2mg/mL碳酸氢钠和15.5mg/mL葡萄糖并具有322mOsm/kg的摩尔渗透压浓度。

7.权利要求1的方法，其中所述供体XY小鼠ES细胞具有遗传修饰。

8.权利要求1的方法，其中步骤(a)中维持所述供体XY小鼠ES细胞还包括对所述供体XY小鼠ES细胞进行遗传修饰。

9.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰包括下列一种或多种：内源核酸序列整体或部分的缺失、一个或多个核酸的取代、内源核酸序列被异源核酸序列的替换、敲除和敲入。

10.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是STEAP2基因的敲除。

11.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是内源核酸序列整体或部分的缺失。

12.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是一个或多个核酸的取代。

13.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是内源核酸序列被异源核酸序列的替换。

14.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是敲除。

15.权利要求7的方法，其中所述遗传修饰是敲入。

16.权利要求7的方法，其中供体XY小鼠ES细胞对于所述遗传修饰是杂合的。

17.权利要求1的方法，其中ES细胞衍生的幼崽与F0代中生成的总幼崽的比大于23％。

18.权利要求17的方法，其中ES细胞衍生的幼崽与F0代中生成的总幼崽的比是至少40％。

19.权利要求18的方法，其中ES细胞衍生的幼崽与F0代中生成的总幼崽的比是至少51％。