[发明专利]一种selaginellin N的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及卷柏中selaginellinN的制备方法，其含量采用HPLC法检测应在95％以上。属于中药提取分离、纯化领域。

背景技术：

中国药典2005年版中规定卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或垫状卷柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的干燥全草。全年均可采收，除去须根及泥沙，晒干。辛，平。归肝、心经。具有活血通经。用于经闭痛经，癥瘕痞块，跌扑损伤。卷柏炭化瘀止血。用于吐血，崩漏，便血，脱肛。卷柏中含有多种化学成分，如黄酮类，现已发现卷柏中含有芹菜素(apigenin)、穗花杉双黄酮(amentoflavone)、扁柏双黄酮(hinokiflavone)、异柳杉素(isocryptomerin)及阿曼托黄色(amentoflavone)等；苯丙素类、生物碱类、酚类、有机酸类等化合物。药理作用显示具有：免疫及抗肿瘤作用、对血液系统的作用、抗病毒、抑菌与抗炎作用、镇痛镇静等作用。本发明提供了一种方便、简便、快速的制备高纯度selaginellinN的方法。目前现有技术中未见此selaginellinN的提取方法。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种从中药卷柏中提取一种含量在95％以上的selaginellinN的制备方法，目的是通过简单的工艺过程得到含量较高(含量大于95％)的selaginellinN。

本发明的技术方案是：从中药卷柏中提取一种含量在95％以上的selaginellinN的制备方法，其具体方法步骤为：

a)将卷柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或垫状卷柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的干燥全草原料切成寸段；

b)用乙醇、甲醇、水中的一种或甲醇-水、乙醇-水按比例(1：9～9：1)混合溶剂回流提取，加入相当于药材重量的2-16倍溶剂，回流提取1-5次，每次0.5至6小时，合并提取液，滤过，得提取液；

c)将提取液回收溶剂并浓缩至相对密度为1.05－1.40(60℃)的清膏或稠膏，按比例(1：10～10：1)加入水，混悬，得混悬液。

d)将混悬液吸附于D101或各种极性、弱极性大孔吸附树脂柱，然后用乙醇-水或甲醇-水(按比例10：1～1：1)的混合溶剂洗脱，分别以每份1/100～1/20总量洗脱剂的体积量收集洗脱液流份，以三氯甲烷：甲醇(10：1～1：1)为展开剂采用TLC检查斑点，合并相同的棕褐色斑点洗脱流份。

e)将合并的相同棕褐色斑点洗脱流份回收溶剂，得棕褐色固体粉末。

f)将棕褐色固体粉末用2-100倍量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一种或两种(1：10～10：1)混合的混合有机溶剂溶解。

g)将棕褐色固体粉末的有机溶剂或混合有机溶剂加入以SephadexLH-20为吸附剂的层析柱上吸附。

h)将吸附棕褐色固体粉末的SephadexLH-20层析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷中的一种或两种(1：10～10：1)混合的混合溶剂分别与乙醇或甲醇(10：1～1：1)的混合溶剂洗脱，分别以每份1/100～1/20总量洗脱剂的体积量收集SephadexLH-20层析柱的黄色色带，直至完全。以三氯甲烷：甲醇(10：1～1：1)为展开剂采用TLC跟踪检查斑点，合并相同的棕褐色斑点洗脱流份。

i)将合并的相同棕褐色斑点洗脱流份回收溶剂，得棕褐色固体粉末，即selaginellinN精制品，其含量采用HPLC法检测应在95％以上，转移率可达75％以上。

所述的甲醇-水、乙醇-水的浓度为30-75％；所述的大孔树脂柱优选D101。

步骤(d)中三氯甲烷：甲醇优选3：1。

步骤(h)中，三氯甲烷：甲醇＝3：1-4：1。

步骤(f)中，所述的有机溶剂为固体粉末的10-30倍量。

selaginellinN结构解析

红色粉末，易溶于甲醇及DMSO，不溶于水。10％硫酸显桃红色，碘熏出现棕黄色斑点，提示该化合物为selaginellin类化合物。

UVλ_max(MeOH)nm：299，274和264nm。