[发明专利]一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法

权利要求书

1.一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，其特征是包括以下步骤：

（1）将羽状蕨藻粉碎，采用微波辅助提取法提取后，获得羽状蕨藻粗提物；

（2）选取高速逆流色谱的溶剂系统；

（3）将步骤（1）获得的羽状蕨藻粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂系统的下相溶解，得到高速逆流色谱分离样液；

（4）采用高速逆流色谱分离步骤（3）的高速逆流色谱分离样液，并收集各流分；

（5）将步骤（4）所得各流分与蕨藻红素标准品采用高效液相色谱分析，通过高效液相色谱的保留时间定性，收集与标准品保留时间一致的流分即为蕨藻红素产品；

步骤（2）中高速逆流色谱的溶剂系统为正己烷-甲醇-水，其中正己烷-甲醇-水的体积比为2:1:1；

步骤（4）中采用高速逆流色谱分离时，分离条件为：流速为1.0~3.0mL/min，转速为800~900 rpm/min，检测波长为315 nm；

步骤（4）中采用高速逆流色谱分离时，以溶剂系统上相为固定相，下相为流动相；

采用高速逆流色谱分离时，固定相的保留率为76.8%；

步骤（5）中蕨藻红素产品的纯度大于95%。

2.根据权利要求1所述的使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，其特征是：步骤（1）中采用微波辅助提取法提取时，微波辅助提取的各项参数为：提取溶剂为体积百分含量为80~100%的乙醇，微波温度为40~60℃，微波功率为100 ~300W，微波时间为5~15 min，料液比为1:30~1:50 g/mL。

3.根据权利要求2所述的使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，其特征是：采用微波辅助提取法提取时，微波辅助提取的各项参数为：提取溶剂为体积百分含量为90%的乙醇，微波温度为50℃，微波功率为300W，微波时间为15 min，料液比为1:40 g/mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述的使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，其特征是：步骤（5）中高效液相色谱的条件为：Athena C18-WP，100A，4.6 mm×150 mm，3 μm；流动相为甲醇-0.2%冰醋酸，二者的体积比为80:20；检测器为88232UV 紫外检测仪；检测波长为315 nm；流速为0.3 mL/min；柱温为30℃；进样量为20 μL。

5.根据权利要求4所述的使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，其特征是：蕨藻红素的保留时间在13.784min附近。