[发明专利]一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法

说明书

技术领域

本发明属于蕨藻红素提取技术领域，具体涉及一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法。

背景技术

蕨藻红素广泛存在于藻类植物中，具有显著的促进或抑制植物生长，延缓果实成熟，花朵衰老，竞争性抑制增长激素，除草剂，脱叶剂等作用，除此之外蕨藻红素还被发现具有较好的抗肿瘤活性。蕨藻红素为橙红色立方晶体，熔点：319-319.5℃，分子式：C₂₄H₁₈N₂O₄，结构式：

蕨藻红素的提取方法多采用溶剂浸提法、多重溶剂重结晶法、索氏提取法等。然而，传统提取方法具有提取效率低、操作复杂、溶剂用量大、耗时长及污染严重等缺点。

微波辅助提取(Mierowave Assisted Extraetion,MAE)作为天然产物提取中一种非常有发展潜力的新型技术，具有穿透力强、效率高、溶剂用量少、提取率高、成本低等优点，已被广泛关注。微波加热可使水等极性分子在微波电磁场中快速转向及定向排列，从而产生撕裂和相互摩擦发热,这种剧烈运动可使植物细胞内部结构发生破坏，有助于有效成分的溶出，同时微波提取的副产物少，有利于提纯。与传统的提取方法相比，MAE可显著提高提取率，减少分析时间并且降低环境污染，减少甚至消除由手工操作中个体差异所产生的误差，提高分析测试的灵敏度、准确度、重现性，这些优势已经使得MAE成为较好的样品前处理方法之一。

高速逆流色谱(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是由Ito.Y.博士研制和开发的新型液液分配色谱技术，它是建立在一种特殊的流体动力学平衡的基础上，利用螺旋管的高速行星式运动产生一种不对称离心力，使互不相溶的两相溶剂不断混合，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂反复进行着混合和静置的分配过程。流动相载着溶质(样品)不断穿过固定相，使样品在两相之间不断反复地进行分配，其分配频率高达每秒13次以上，由于样品中各组分在两相溶剂中的溶解度、分配能力不同，导致在螺旋管中的迁移速度也不同，因而使样品中的组分得到高效快速的分离。HSCCC不需要固体支撑体，因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段，具有适用范围广、制备量大、操作简单、高效快速等优点，广泛应用于天然产物分离纯化、生物医药、环境分析、材料、化工、海洋生物和食品等领域，并已制备出包括黄酮类、蒽醌类、皂苷类、大环内酯类、儿茶素类、多酚类、糖蛋白类、多糖类在内的数百种单体成分。

近年来，国内外应用HSCCC分离天然植物中活性物质的研究已有很多，2013年1月16日公开的公开号为CN102875506的专利申请公开了一种利用高速逆流色谱法制备西瑞香素的方法；2012年12月19日公开的公开号为CN102827242的专利申请公开了一种棱角丝瓜甙A的提纯方法，该方法亦是采用高速逆流色谱法来实现分离纯化目的的；2012年10月3日公开的公开号为CN102702289的专利申请公开了应用高速逆流色谱法从大叶白麻中纯化三种黄酮苷的方法。

然而，国内外对于羽状蕨藻的研究甚少，对于羽状蕨藻中蕨藻红素的分离纯化方法也不多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，该方法采用微波辅助法提取羽状蕨藻中的蕨藻红素，该方法具有提取效率高，操作简便，溶剂用量少且提取时间短等优点，同时采用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素，获得的蕨藻红素产品纯度高，本发明通过将微波提取与高速逆流色谱相结合，可以获得高提取率和高纯度的蕨藻红素。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来是实现的：一种使用高速逆流色谱分离羽状蕨藻中蕨藻红素的方法，包括以下步骤：

(1)将羽状蕨藻粉碎，采用微波辅助提取法提取后，获得羽状蕨藻粗提物；

(2)选取高速逆流色谱的溶剂系统；

(3)将步骤(1)获得的羽状蕨藻粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂系统的下相溶解，得到高速逆流色谱分离样液；

(4)采用高速逆流色谱分离步骤(3)的高速逆流色谱分离样液，并收集各流分；