[发明专利]一种基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法

权利要求书

1.一种基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

步骤一：设计用于扩增目的基因的引物序列，并且给两条序列加上Tag便签序列，两段序列中间用偶氮苯隔开作为修饰；

步骤二：设计用于检测两条Tag标签序列的胶体金核酸试纸条所需序列；

步骤三：按照步骤二的设计要求，将核酸标记胶体金，并制备胶体金核酸试纸条；

步骤四：混合PCR反应体系，并将混合后的PCR反应体系放入PCR仪进行反应；

步骤五：利用胶体金核酸试纸条检测PCR产物。

2.根据基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法，其特征在于：所述步骤一具体如下：根据待测Target序列设计上下游引物，并在设计好的序列段中分别加入Tag1和Tag2序列，形成的PrimerF/R包含一个偶氮苯(X)。

3.根据基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法，其特征在于：所述步骤二具体如下：设计标记胶体金的序列，通过巯基SH修饰，从而与胶体金通过金硫键Au-S结合，与Tag1互补；设计与Tag2互补的序列，用于固定在T线区域；设计与标记胶体金序列互补的序列，用于固定在C线区域。

4.根据基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法，其特征在于：所述步骤三具体如下：将制备好的核酸-金标记物用划膜喷金仪喷在玻璃纤维膜上(金标垫)；并将T-lineDNA和C-lineDNA用划膜喷金仪划在硝酸纤维素膜上，构成检测区和质控区；把样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫分别组装在PVC板上，每个部分重叠2mm，保证层析过程顺利进行；将组装好的试纸条用自动斩切机，切割成3mm宽。

5.根据基于PCR扩增产生单链标签Tag的方法，其特征在于：所述步骤五具体如下：将PCR产物滴加到样品垫上；缓慢滴加上样缓冲液，让样品在胶体金核酸试纸条上缓慢前行，5分钟后，观察结果。