[发明专利]一种β‑烟酰胺单核苷酸的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及核苷酸类辅酶方法，尤其涉及一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法。

背景技术

β-烟酰胺单核苷酸（NMN）是辅酶I的合成底物，在被烟酰胺核苷酸腺苷转移酶腺苷化后即变成辅酶I（NAD）。在生物体内NMN的水平和烟酰胺核苷酸腺苷转移酶（NAMPT）的活性直接影响到NAD的浓度，同时NMN直接参与体内腺苷转移，是体内重要的一种合成底物和功能调节物质。在治疗应用方面，NMN可以用于抗衰老、治疗慢性病等，同时研究表明NMN还对胰岛素的分泌起到调节作用，对mRNA表达水平也有影响。因此，NMN在医药治疗方面有着广泛的应用前景，同时也作为一种反应底物在化工方面有着广泛的市场前景。

NMN一般应用离子交换树脂进行纯化，由于其与多种类似物如NAD带电荷和极性极为相近，分离纯化有很大困难，无法将其中的类似物杂质完全去除，所以离子交换法获得的产品纯度只有60%左右，收率只有40%，生产效率低下，不适合规模化生产。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，旨在解决β-烟酰胺单核苷酸的纯化过程中其他电荷和极性相近的类似物难以除尽，且产品纯度低、收率低的问题。

为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，包括以下步骤：

a、将经过预处理的β-烟酰胺单核苷酸溶液用膜浓缩设备先后进行微滤和纳滤，收集浓缩的粗品溶液；

b、将获得的粗品溶液pH值调至3-7，进样上反相高效液相色谱制备柱，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为盐酸溶液配成的pH3-7的溶液，流动相B为乙醇，进行梯度洗脱纯化，得到纯化的样品溶液；

c、将纯化的样品溶液用膜浓缩设备进行纳滤后，用真空冷冻干燥机冻干，获得纯化的β-烟酰胺单核苷酸。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤a中用于微滤的微滤膜孔径为0.2-1μm。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤a中用于纳滤的纳滤膜，其截留分子量为200。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤a中用于纳滤的纳滤膜为中空纤维膜。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤a中浓缩的粗品溶液的浓度为20-30g/L。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤c中纯化的样品溶液用膜浓缩设备进行纳滤后的浓度为100~150g/L。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤b中按体积比计，流动相A：流动相B为2：98-1：1之间。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤c中用于纳滤的纳滤膜为截留分子量为200的中空纤维膜。

所述的β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，其中，所述步骤b中，梯度洗脱时的洗脱时间为40min。

有益效果：本发明应用十八烷基硅烷键合硅胶进行高效液相制备，对β-烟酰胺单核苷酸进行纯化，使β-烟酰胺单核苷酸的纯度可以达到98%，收率可以到达80%以上，生产效率也比其他工艺提高了2倍以上。有效解决了β-烟酰胺单核苷酸的纯化过程中其他电荷和极性相近的类似物难以除尽的问题。

具体实施方式

本发明提供了一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明一种β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法的较佳实施例，其包括以下步骤：

S100、将经过预处理的β-烟酰胺单核苷酸溶液用膜浓缩设备先后进行微滤和纳滤，收集浓缩的粗品溶液；

S200、将获得的粗品溶液pH值调至3-7，进样上反相高效液相色谱制备柱，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为盐酸溶液配成的pH3-7的溶液，流动相B为乙醇，进行梯度洗脱纯化，得到纯化的样品溶液；

S300、将纯化的样品溶液用膜浓缩设备进行纳滤后，用真空冷冻干燥机冻干，获得纯化的β-烟酰胺单核苷酸。