[发明专利]一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条

权利要求书

1.一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，包括鸡抗CIV金标抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC底板，其特征在于：所述的硝酸纤维膜黏贴于PVC底板中央，玻璃纤维膜由样品垫与结合垫一端重叠连接制成，结合垫的另一端与粘贴在硝酸纤维膜划有T线的一端，硝酸纤维膜划有C线的一端粘贴有吸水垫。

2.根据权利要求1所述的一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，其特征在于：所述的硝酸纤维素膜通过以下方法制备：用包被液将鸡抗CIV抗体稀释成2μg/cm在硝酸纤维素膜的一端划线作为检测线T线，用包被液将兔抗鸡IgG抗体稀释成1.5μg/cm在硝酸纤维素膜另一端划线作为检测线C线，两线间距0.5cm，室温放置15min，待抗体完全吸附于膜上后，移至封闭液封闭30min，然后用pH 7.4、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液漂洗三次，2min/次，置于37℃烘箱中干燥，密封，4℃保存。

3.根据权利要求1所述的一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，其特征在于：所述的鸡抗CIV金标抗体玻璃纤维膜通过以下方法制备：将金标抗体原液用金标抗体稀释液进行1∶2稀释，按4μg/cm2喷涂于玻璃纤维膜结合垫端，喷涂面积为0.5cm×0.5cm，37℃吸附1h，然后浸泡在封闭液中封闭0.2cm，于37℃温箱中干燥，4℃保存备用。

4.根据权利要求3所述的一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，其特征在于：所述的封闭液为：BSA3g、蔗糖2.5g、吐温20 100μL、PVP-K30 0.3g，叠氮钠0.01g，加入0.01mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)液溶解并定容至100mL。

5.根据权利要求3所述的一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，其特征在于：所述的玻璃纤维膜通过以下预处理方法得到：玻璃纤维膜用pH8.5的Tris-HCl缓冲液将玻璃纤维膜漂洗三次，5min/次，将漂洗好的玻璃纤维膜37℃烘干，用含有2％BSA、2.5％蔗糖、1％吐温20、0.3％PVP-K30以及0.02％叠氮钠的0.01mol/L、pH 7.4的磷酸盐缓冲液封闭，于37℃温箱中干燥。

6.权利要求3所述鸡抗CIV金标抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)取20mL胶体金，用0.1mol K₂CO₃调节胶体金溶液pH至8.5，将胶体金溶液3500r/min离心15min，弃沉淀，在磁力速搅拌下，向胶体金溶液中缓慢加入221.076μg/mLCIV抗体至终浓度为44.22ug/mL持续搅拌30min；

2)加10％BSA牛血清白蛋白至终浓度1％，室温搅拌10min；

3)加10％PEG 20000至终浓度0.2％，室温搅拌10min；

4)将金标抗体溶液4℃3500rpm离心20min，上清液4℃12000rpm离心1h，沉淀用金标抗体保存液稀释至原体积，重复离心2次，沉淀用金标抗体保存液稀释为原体积的1/20，用0.45μm滤膜过滤，置4℃冰箱保存备用。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的保存液为：BSA 0.1g，PEG20000 0.05g，NaN₃ 0.02g，用30mL 0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液溶解并定容至100mL。