[发明专利]一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条

说明书

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条。

背景技术

鸡传染性贫血病(CIA)是由鸡传染性贫血病毒(CIV)引起的以雏鸡再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下肌肉出血等为特征的一种免疫抑制性传染病。CIA引起鸡群的死亡增加、成活率和体增重降低。又因免疫器官损伤引起严重的免疫抑制，降低鸡群的抵抗力，增加鸡群对各种病原的易感性，降低鸡群对各种常规疫苗免疫接种效果，给其他疾病的防治带来很大困难，同时会造成继发感染，给养鸡业带来很大的损失。CIA自1979年Yuasa等在日本首次报道以来，德国、瑞典、英国等相继分离到CIV。我国于1992年首次分离到CIV，近年来，在某些地区本病的发生有增加趋势。

目前，诊断CIA的方法包括：病毒分离鉴定、血清学诊断(包括病毒中和试验(NV)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA))和生物技术方法诊断(包括PCR技术、核酸探针技术)等。病毒分离鉴定虽然是诊断CIA的有效手段，优点是特异性强，但费时费力，容易延误该病的治疗；免疫荧光、ELASA等血清学诊断方法虽然具有微量、特异、快速、准确的优点，但需要比较完备的仪器设备和经验丰富的技术人员来操作和判断结果，对于基层兽医站或鸡场等不适用。PCR及核酸探针的诊断更需要有特殊的仪器和药品，且技术含量高，很难在基层推广应用。因此，迫切需要建立一种简单、快速，灵敏，廉价，适合于基层应用的鸡传染性贫血病毒的快速检测方法。国内外己研制出了鸡传染性贫血病病毒抗体的ELISA快速检测试剂盒，此试剂盒是检测血清中鸡传染性贫血病病毒抗体，但在用这种诊断试剂盒的操作过程中，一些试剂需要现场配制，此试剂盒的使用也显得不太方便。国内梁智选进行过鸡传染性贫血病毒抗体斑点免疫胶体金渗滤试验检测方法，是对血清中鸡传染性贫血病病毒抗体的检测，但是存在硝酸银对环境污染的危险。迄今为止，还未见有关鸡传染性贫血病毒胶体金快速检测试纸条方法建立的报道。

发明内容

本发明针对现有技术对鸡传染性贫血病毒快速检测的技术缺陷，旨在提供一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，提供了一种简单、快速、廉价，不需任何仪器，特别适合于基层应用检测鸡传染性贫血病毒(CIV)的新方法。既可以用于鸡传染性贫血病(CIA)的诊断，也可以用于CIA的检疫，具有广阔应用前景，对于有效控制CIA的发生和流行具有重要意义。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种鸡传染性贫血病毒检测胶体金试纸条，包括鸡抗CIV金标抗体玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC底板，其中硝酸纤维膜粘贴于PVC底板中央，玻璃纤维膜由样品垫与结合垫组成，结合垫端粘贴在硝酸纤维膜划有T线的一端，并重叠0.2cm，硝酸纤维膜划有C线的一端粘贴有吸水垫，并重叠0.2cm。

所述的硝酸纤维素膜通过以下方法制备：硝酸纤维素膜剪成0.5cm×2.5cm，用包被液将鸡抗CIV抗体稀释成2μg/cm²在硝酸纤维素膜的一端划线作为检测线T线，用包被液将兔抗鸡IgG抗体稀释成1.5μg/cm在硝酸纤维素膜另一端划线作为检测线C线，两线间距0.5cm，室温放置15min，待抗体完全吸附于膜上后，移至封闭液封闭30min，然后用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)漂洗三次，2min/次，置于37℃烘箱中干燥，密封，4℃保存。所述的鸡抗CIV抗体和兔抗鸡IgG抗体的稀释度为1∶2。

所述的鸡抗CIV金标抗体玻璃纤维膜通过以下方法制备：将金标抗体原液用金标抗体稀释液进行1∶2稀释，按4μg/cm²喷涂于玻璃纤维膜结合垫端，喷涂的面积为0.5cm×0.5cm，37℃吸附1h，然后浸泡在封闭液中封闭0.2cm，于37℃温箱中干燥。4℃保存备用。

所述的封闭液为：BSA3g、蔗糖2.5g、吐温20 100μL、PVP-K30 0.3g，叠氮钠0.01g，加入0.01mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5)液溶解并定容至100mL。

所述的玻璃纤维膜通过以下预处理方法得到：玻璃纤维膜剪成0.5cm×3.0cm，用pH8.5的Tris-HCl缓冲液将玻璃纤维膜漂洗三次，5min/次，将漂洗好的玻璃纤维膜37℃烘干，用含有2％BSA、2.5％蔗糖、1％吐温20、0.3％PVP-K30以及0.02％叠氮钠的0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)封闭，于37℃温箱中干燥。

本发明鸡抗CIV金标抗体通过以下方法制备：