[发明专利]新特性腈水合酶诱导的高含量烟酰胺合成

权利要求书

1.新特性腈水合酶诱导的高含量烟酰胺合成的方法，其特征在于：采用的是二元复合腈水合酶，该复合酶是由白被芽孢杆菌和红球菌组合培养产生，具体合成方法：

 将甘油管保存的白被芽孢杆菌和红球菌接种到适用于白被芽孢杆菌和红球菌的培养基中进行发酵培养，然后对发酵液进行纱布清洗，得到菌体，将菌体细胞或处理过的菌体细胞添加到含有3-氰基吡啶溶液中进行水解反应，最后对转化液进行分离，即得烟酰胺。

2.根据权利要求1所述的新特性腈水合酶诱导的高含量烟酰胺合成方法，其特征是，包括以下步骤：

    （1）种子培养：种子培养基组成：0.5～8%甘油，0.2～8%酵母膏，0.05～0.5%NaCl，0.05～0.5% K₂HPO₄，0.05～0.5% MgSO₄，0.1～1%尿素，用去离子水配制，pH适中；取种子培养基，分装三角瓶中，灭菌，然后接入菌种白被芽孢杆菌和红球菌，摇床转速80~450 r/min，在15~50℃摇床培养25~85h作为种子液，备用；

（2）发酵培养：发酵培养基组成：1～8%甘油，0.1～5%的葡萄糖或蔗糖，0.2～3%酵母粉，0.1～5%的尿素， 0.05～0.8% K₂HPO₄， 0.05～0.8% MgSO₄，1～30ppm CoCl₂，用去离子水配制，将发酵培养基分装、灭菌，接入种子液，pH 6.5～8.5，温度20~80℃下培养10～25 h；

   （3）催化水解：将发酵液经纱布清洗，获得纯净的产腈水合酶母细胞；将产腈水合酶细胞和去离子水按照1:10的质量比悬浮于去离子水中，然后分批加入到反应釜中，细胞液与反应液体积的比例维持在≥1%，反应液中还含有体积浓度0.1-15%的助溶剂，在5～85℃的温度下，搅拌进行酶催化反应，反应过程中采用底物和催化剂耦合分批补加方式，补加3-氰基吡啶的固体或者溶液使底物浓度控制在20～60%，经6～48h的反应，获得浓度在20%以上的烟酰胺溶液，浓度累积≥20%后一次性出罐，将达到一定浓度的反应液通过微滤去除细胞及细胞碎片，得到烟酰胺溶液；

  （4）纯化处理：将反应液经过纳滤去除蛋白质，然后加入活性炭脱色，再进行浓缩，浓缩后的溶液再进行喷雾造粒和气流干燥就得到成品纯度在99.9%以上的烟酰胺。

3.根据权利要求2所述的新特性腈水合酶诱导的高含量烟酰胺合成方法，其特征是： 所述助溶剂选自：甲醇、乙醇、二甲亚砜、乙二醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-800、氯仿、丙酮中的一种。