[发明专利]一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、巴氏杆菌三联灭活疫苗

权利要求书

1.一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗，其特征在于，该疫苗由抗原和常规疫苗佐剂组成，所述抗原包括水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌，其中多杀巴氏杆菌的保藏号为：CGMCC No:10334；保藏时间：2015年01月29号；保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为多杀巴氏杆菌Pasteurella muttocida；

所述疫苗中水貂绿脓杆菌灭活前的细菌浓度不少于30亿CFU/mL；所述克雷伯氏菌灭活前的细菌浓度不少于20亿CFU/mL；所述多杀巴氏杆菌灭活前的细菌浓度不少于30亿CFU/mL。

2.如权利要求1所述的水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1 ) 将水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌菌株分别培养繁殖其生产用种子，并进行纯粹检验；

2 )将上述用于生产的水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌种子液分别接种到生物反应器培养基中进行发酵増殖培养，同时，对该产物进行纯粹检验及活菌计数；

3)将增殖培养后的三种菌株进行灭活，制得灭活抗原液，并对该产物进行灭活检验和无菌检验；

4 )将灭活后且检验合格的灭活抗原液离心处理，15000rpm- 20000rpm连续离心，弃去上清收集菌泥，并对菌泥按一定比例进行稀释，置2-8℃条件下保存；

5 )将用于生产的水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌三种灭活且处理后的三种等量抗原与佐剂混合，制备水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗，并进行物理性状检验、无菌检验、安全检验、效力检验和甲醛硫柳汞残余量检验；

6 )水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗分装、贮存。