[发明专利]一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、巴氏杆菌三联灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明公开一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗及制备方法。可用于预防水貂的绿脓杆菌病、克雷伯氏菌病和多杀巴氏杆菌病以及三者的混合感染，涉及经济动物疫苗生产技术领域。

背景技术

水貂绿脓杆菌病，其病原体为铜绿假单胞菌，由于侵入机体后可产生绿色脓汁，故而习惯上称之为绿脓杆菌。绿脓杆菌为一种条件致病菌，存在于正常健康动物的机体内，当机体受到应激或免疫功能下降时，它才有机会感染机体。绿脓杆菌为革兰氏阴性杆菌或球菌，对营养要求不高，在普通培养基中即可生长。由于在生长过程中能产生绿脓素和荧光素，所以培养基上会被染成蓝绿色。绿脓杆菌可引起水貂的出血性肺炎，此病多发生于秋季，主要以发病急，死亡快，呈暴发性流行为特点。1983年，此病首次在我国被报导，死亡率达到24.1%，第二年，山东一家水貂养殖场暴发了水貂出血性肺炎，200多只水貂死亡了67只，死亡率达到了31%以上。此后，2000-2013年，山东、吉林、辽宁、河北、内蒙古等各省的大型水貂养殖场都相继发生了水貂出血性肺炎，严重影响着我国水貂养殖业的发展。此外，绿脓杆菌对外界环境的适应性极强，能在各种复杂的环境中生存。它有着很强的耐药性，所以，一旦感染此菌再去治疗，达不到很好的效果。因此，利用疫苗接种来预防疾病显得尤为重要。

水貂克雷伯氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，为典型的条件致病菌。该菌普遍存在自然界中，如水、土壤、空气以及饲喂的食物中，另外在动物的呼吸道和肠道内也较常见。但只有当机体免疫力下降时，才能引发此病的大规模流行。由于水貂在运输过程中或突然改变环境而受到应激，抵抗力下降，此时，体内的克雷伯氏菌开始大量繁殖，一旦形成感染很难控制，死亡率达到50%以上。因此，此病在水貂养殖业中越来越受到重视。

多杀巴氏杆菌是一种两端钝圆的短杆菌，为革兰氏阴性的需氧兼厌氧菌。对营养要求较严格，在普通培养基上生长贫瘠，需加有血液或血清的培养基中才能生长良好。多杀巴氏杆菌为一种可引起畜禽共患的急性、烈性传染病。多数患病的水貂会呈现暴死现象，该病的发病率达60%以上，死亡率达90%。而慢性型的也多表现为体温升高，精神沉郁，食欲下降，呼吸困难等症状。此病多数为急性发作，给水貂养殖业带来极大的损失。

近年来，中国的养殖业，尤其是经济动物养殖业在迅猛发展，但与此同时，在管理水平上并没有得到相应的提高，在预防疾病方面，不能及时有效地利用疫苗来控制疾病，一旦发生疫病，一定程度上会给业主带来极大的经济损失。近几年，革兰氏阳性菌的感染越来越少，而革兰氏阴性菌的感染却日益增加，特别是一些条件致病菌和引起急性死亡的细菌再度出现。水貂的绿脓杆菌、克雷伯氏菌及多杀巴氏杆菌均可引起水貂的出血性疾病，绿脓杆菌和克雷伯氏菌均为重要的条件致病菌，而多杀性多杀巴氏杆菌更是引起急性败血症的致病菌。通过相应的疫苗可预防疾病的发生，但随着水貂养殖业的发展，水貂的疾病的发生主要以二重感染和多重感染为主。所以，在一定程度上，单价疫苗不能够达到很好的预防多种疾病的较果，同时，多种单价的使用往往存在多种禁忌，也增加了感染机率。

发明内容

本发明公开了一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗，从根本上解决了多种单价疫苗在使用时往往存在多种禁忌，不仅可预防三种疾病的混合感染，同时，也提高了对其单一疾病的免疫保护率。

本发明所述的一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌、多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗，其特征在于：

该疫苗由抗原和常规疫苗佐剂组成，所述抗原包括水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌，其中，多杀巴氏杆菌的保藏号为：CGMCC No: 10334；保藏时间：2015年01月09日；保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为多杀巴氏杆菌Pasteurella muttocida。

本发明公开了一种水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌及多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗及其制备方法，其特征在于：

所述疫苗中水貂绿脓杆菌灭活前的细菌浓度不少于30亿CFU/mL；克雷伯氏菌灭活前的细菌浓度不少于20亿CFU/mL；多杀巴氏杆菌灭活前的细菌浓度不少于30亿CFU/mL。

本发明所述的水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1、将水貂绿脓杆菌、克雷伯氏菌和多杀巴氏杆菌菌株分别培养繁殖其生产用种子，并进行纯粹检验；