[发明专利]一种预示和鉴定西瓜果肉颜色的分子标记KpnI‑1及应用有效
申请号: | 201510117029.2 | 申请日: | 2015-03-17 |
公开(公告)号: | CN104711355B | 公开(公告)日: | 2018-03-02 |
发明(设计)人: | 朱子成;马鸿艳;栾非时;李冰 | 申请(专利权)人: | 东北农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11;C12N15/10 |
代理公司: | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人: | 张勇 |
地址: | 150030 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 预示 鉴定 西瓜 果肉 颜色 分子 标记 kpni 应用 | ||
1.一种预示和鉴定西瓜果肉颜色的方法,其特征在于,步骤如下:
1)提取待测样品的DNA;
2)以待测样品的DNA为模板,利用鉴别引物对进行PCR扩增,获得扩增产物;所述鉴别引物对,正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;
3)利用限制性内切酶KpnI对步骤2)所得的扩增产物进行酶切,获得酶切产物;
4)利用琼脂糖凝胶电泳对步骤3)所得的酶切产物进行检测;步骤4)所述对酶切产物进行检测,是利用琼脂糖凝胶电泳检测酶切后的产物条带是否为517bp,含有517bp条带的样品含有番茄红素,果肉颜色为红色;获得390bp及127bp的两个片段样品不含有番茄红素,果肉颜色为黄色。
2.权利要求1所述方法,其特征在于,步骤2)所述PCR扩增,采用降落PCR,扩增程序为:94℃预变性7min,94℃变性30s,60℃退火30s,每循环降低0.5℃,72℃延伸40s,30个循环;94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸40s,10个循环;72℃延伸10min,4℃保存。
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