[发明专利]一种双酶敏感型荧光探针及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201510117147.3 | 申请日： | 2015-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN104672300A | 公开（公告）日： | 2015-06-03 |
| 发明（设计）人： | 张先正;李仕颖;刘理涵;曾旋 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C07K7/02 | 分类号： | C07K7/02;C09K11/06;C12Q1/37;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 敏感 荧光 探针 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种双酶敏感型荧光探针，其特征在于：包含凋亡酶特异性识别多肽序列、基质金属蛋白酶特异性识别多肽序列和两对能量共振转移的分子荧光对。
2.根据权利要求1所述的双酶敏感型荧光探针，其特征在于：所述的两对能量共振转移分子荧光对的给体为同一给体。
3.根据权利要求2所述的双酶敏感型荧光探针，其特征在于：所述的分子荧光对是以荧光素为同一给体和以不同二甲氨基偶氮苯为受体的荧光淬灭分子荧光对。
4.根据权利要求1或3所述的双酶敏感型荧光探针，其特征在于：所述的凋亡酶特异性识别多肽序列为包含氨基酸-氨基酸-氨基酸-天冬氨酸的多肽序列；所述的基质金属蛋白酶特异性识别多肽序列为脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸、脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-亮氨酸-丙氨酸-甘氨酸、脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-丙氨酸-甘氨酸、甘氨酸-脯氨酸-脯氨酸-甘氨酸-缬氨酸-缬氨酸-甘氨酸-谷氨酸-赖氨酸-甘氨酸-谷氨酸-谷氨酰胺中的一种。
5.根据权利要求4所述的双酶敏感型荧光探针，其特征在于：所述的包含氨基酸-氨基酸-氨基酸-天冬氨酸的多肽序列为天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸或色氨酸-谷氨酸-组氨酸-天冬氨酸。
6.根据权利要求5所述的双酶敏感型荧光探针，其特征在于：化学名为二甲氨基偶氮苯-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-赖氨酸(荧光素)-丝氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-赖氨酸-二甲氨基偶氮苯，化学结构如式(Ⅰ)所示：
7.一种权利要求6所述的双酶敏感型荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(A)合成二甲氨基偶氮苯-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸、荧光素-赖氨酸-丝氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-赖氨酸-二甲氨基偶氮苯；
(B)将二甲氨基偶氮苯-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸与荧光素-赖氨酸-丝氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-赖氨酸-二甲氨基偶氮苯进行缩合，即得到式(Ⅰ)所示的检测基质金属蛋白酶和凋亡酶的荧光探针。
8.根据权利要求7所述的双酶敏感型荧光探针的制备方法，其特征在于：
所述的步骤(A)中，二甲氨基偶氮苯-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸和荧光素-赖氨酸-丝氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-赖氨酸-二甲氨基偶氮苯的合成采用多肽固相合成方法；
所述的步骤(B)采用固相片段缩合的方法。
9.根据权利要求8所述的双酶敏感型荧光探针的制备方法，其特征在于：多肽固相合成中采用的树脂为2-氯-三苯甲基氯树脂、Rink Amide树脂、MBHA树脂中的一种。
10.权利要求1-6任一项所述的双酶敏感型荧光探针在化学体系、生物体系中基质金属蛋白酶和凋亡酶活性检测及凋亡酶抑制剂和基质金属蛋白酶抑制剂的筛选中的应用。
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