[发明专利]抗副溶血弧菌OMPK卵黄抗体制备及其应用

权利要求书

1.一种抗副溶血弧菌ompk的卵黄抗体制备方法，其特征在于利用副溶血弧菌重组ompk蛋白对蛋鸡进行接种免疫，对接种后的鸡所产的鸡蛋在除去蛋白后用蒸馏水漂洗得到纯卵黄液，对纯卵黄液进行离心、收集上清液，应用饱和硫酸铵溶液沉淀法制备粗制的卵黄抗体，再应用凝胶层析柱进一步纯化，获得精制抗副溶血弧菌ompk的卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的副溶血弧菌重组ompk蛋白的制备方法，根据ompk基因序列设计引物，利用所述引物对抗副溶血弧菌的基因组DNA进行PCR扩增，用琼脂糖凝胶分离并回收ompk片段，并用试剂盒纯化回收的ompk片段，将纯化后的ompk片段、原核表达载体pET28a进行双酶切，用T4连接酶连接ompk酶切回收产物和pET28a酶切回收产物，得到重组阳性质粒，将重组阳性质粒在BL21感受态细胞中诱导表达，表达产物利用柱层析进行纯化。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述根据ompk基因序列设计引物：上游引物vp1-ompk-28a-F：5’-CCGGAATTCTTCGGCGGTCGCTCTGG-3’

下游引物vp1-ompk-28a-R：5’-CGCGTCGACGAACTTGTAAGTTACTGC-3’。

4.一种抗副溶血弧菌ompk的卵黄抗体间接ELISA方法，其特征在于所述方法的反应条件：抗原工作浓度浓度为1×10⁸cfu/mL，包被4℃过夜；一抗IgY稀释度为1:2⁸；IgY-HRP酶标抗体作1:20000稀释；选择底物的反应时间为20min。