[发明专利]基于内吗啡肽2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽及其合成方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生化技术领域，涉及一类基于内源阿片肽——内吗啡肽2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽及其合成方法。本发明同时还涉及上述分叉型杂交肽EKR和RKE在受体激动、痛觉调节、耐受和成瘾、便秘等方面的药理学活性。

背景技术

疼痛在临床医学治疗和病人生活质量提高等方面都具有重要意义。目前，临床最广泛应用的阿片类镇痛药物常伴随一些副作用，如镇痛耐受、便秘和成瘾等，从而大大限制了其临床应用。因此，研究和开发低副作用的高效镇痛新药具有广阔的应用前景。

研究表明，在保持阿片药物镇痛活性的同时有效减少其副作用的策略主要有以下三种：一、以其母体为模板，通过化学修饰来筛选出受体选择性较高和具有优势构象的类似物，从而达到保持较高生物活性并降低其副作用目的，如高选择性阿片类配体的筛选。二、通过阿片类物质与其它药物的联合使用，使它们发挥镇痛增效作用，从而降低阿片药物的给药剂量来减少其副作用，如大麻和阿片的联合注射 (Pain, 2003, 303:308)。三、基于阿片肽与其它系统的配体而构建全新的多靶标药物，使其同时作用于多个作用位点，在发挥阿片镇痛活性的同时通过其他系统的调节作用来降低其副作用。目前，人们在阿片类嵌合肽研究方面已取得了一定的进展，如内吗啡肽2（EM-2）和速激肽P物质构成的杂合肽ESP7 (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A, 2000, 97:7621) 、基于EM-2和NPFF的嵌合肽EN-9（ZL201110097843.4）和基于阿片肽Biphalin和神经肽FF的嵌合肽BN-9（ZL201210098832.2）。

众所周知，EM-2是从哺乳动物脑内提取到的内源性阿片肽之一，其对Mu阿片受体具有极高的选择性和亲和性，同时又能激活Kappa阿片受体 (Nature , 1997, 499:502)。而神经肽FF被认为是内源的阿片调节肽 (Curr. Top. Med. Chem, 2005, 5:341)。NPFF在不同水平的注射表现出或原阿片或抗阿片的活性 (Eur. J. Pharmacol. 1998, 167:172)。尤其是NPFF系统在阿片的耐受和成瘾方面具有显著的调节作用，如NPFF系统的选择性拮抗剂RF9能完全抑制长期使用阿片类引起的痛觉过敏和阻止伴随的镇痛耐受的产生 (Proc Natl Acad Sci U. S. A. 2006, 466:471和Br J Pharmacol. 2012, 165:424)。在以上研究基础上，本实验室基于EM-2与RF9而构建全新的分叉型杂交肽，以期同时具有阿片受体激动剂和NPFF拮抗剂的药理学功能，这样可能在保持EM-2镇痛活性的同时尽量减少其阿片耐受等副作用。

发明内容

本发明的主要目的是针对现有镇痛药物中存在的问题，提供一种副作用低、镇痛效果好的基于内源阿片肽EM-2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽EKR和RKE；

本发明的另一目的是提供上述分叉型杂交肽EKR和RKE的合成方法。

本发明还有一个目的，就是提供上述分叉型杂交肽EKR和RKE在受体激动、痛觉调节、耐受和成瘾、便秘等方面的药理学活性，以期在制备镇痛药物中得到应用。

（一）基于内源阿片肽EM-2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽

本发明基于内源阿片肽EM-2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽EKR和RKE，是以内源阿片肽EM-2和神经肽NPFF系统的拮抗剂RF9为化学模板，以Lys作为化学连接子而构建的分叉型杂交肽。其结构为下式结构之一：

（二）基于阿片肽内吗啡肽2和NPFF受体拮抗剂RF9的分叉型杂交肽的合成

分叉型杂交肽的合成方法，包括以下工艺步骤：

. EKR、RKE的合成

.树脂预处理

Rink-Amide-MBHA树脂在二氯甲烷中搅拌，使树脂充分溶胀后减压抽干溶剂；

.脱除Fmoc基团保护

在溶胀、抽干溶剂的树脂中，加入六氢吡啶、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)、DMF的混合溶液，搅拌反应5 min后抽干，重复3次；最后加入DMF洗涤，茚检，得到脱除Fmoc基团保护的树脂；

所述混合溶液中，六氢吡啶、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯、DMF的体积比为1:1:98。