[发明专利]一种川百合组培快繁方法

说明书

技术领域

    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种川百合组培快繁方法。

背景技术

百合作为“球根花卉之王”，是世界重要的商品花卉。在中国传统文化中,百合被视为“百年好合、幸福祥和”的象征,是国人最受欢迎的花卉之一。

我国百合属植物种质资源十分丰富，是百合的起源中心和自然分布中心，原产我国的百合属植物约有55个种和18个变种，分布遍及全国各地，其中西南和华中是百合属植物的集中分布地区。广阔的地域分布和各异的自然环境产生了丰富的百合自然变种和生态类型。虽然我国百合属植物种类繁多，很多具有很高的观赏价值和经济价值，但目前我国的野生百合利用率还较小，大多数并未得到应有的关注和保护，仍有很多优良的野生百合种质资源有待发掘。

 川百合（Lilium davidii）是原产于我国的特有野生种,是百合属中兼具优良观赏价值和较高食用价值的花卉，且川百合抗病性强，是较好的抗性育种材料，广泛分布在云南、四川、甘肃、河南、陕西、湖北等海拔山坡草地、林下潮湿处或林缘。近年来我国百合生产和消费量呈现急剧上升的趋势,市场上百合种球需求量巨大。但是目前我国百合生产中的商品种球85%以上是从荷兰和日本等国家引进，使生产成本一直居高不下，严重制约了我国百合产业的发展。长期以来，川百合的引种驯化并未得到重视，其珍贵的种质资源未得到有效利用。因此，本发明以川百合鳞茎为外植体，通过不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了川百合离体再植株，建立川百合组织培养快速繁殖技术体系，不但可以保护这些珍贵的野生花卉资源,而且也为后期的育种工作特别是百合属植物的矮化及抗性育种提供基础材料。

发明内容

    本发明的目的在于提供出一种川百合组培快繁方法，本发明以川百合鳞茎为外植体，通过不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了川百合离体再植株，建立川百合组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种川百合组培快繁方法，包括以下的步骤：

（1）外植体消毒：选取健康、无病害川百合鳞莲,将鳞片剥下大致分为外层麟片、中层鳞片和内层鳞片,分别用水洗去外部泥土,洗衣粉浸泡10～30min，然后置于自来水下冲洗30～60min，晾干,最后转入超净工作台上以70%～80%乙醇溶液浸泡20s～60s，无菌水冲洗4～6次，再用0.1%～0.2%升汞溶液消毒5～15min，然后用无菌水冲洗外植体至无泡沫为止。消毒期间注意振荡摇晃,使鳞片与消毒液、无菌水充分接触,最后将灭好菌的鳞片置于无菌的滤纸上吸干表面水分备用。

    （2）不定芽诱导：将已经灭菌的鳞片切成1.0cm×l.Ocm左右的小块,小块四周均有切口，以鳞片的近轴面朝上的方式接种到诱导培养基进行不定芽诱导培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养15天后统计污染率，45天后统率诱导率。

    （3）增殖培养：将诱导所得到的不定芽切分成单芽接种到增殖培养基上进行继代培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养40天后统计增殖情况。

（4）生根培养：从基部切取步骤（3）增殖培养中获的小鳞茎并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计生根情况。

（5）炼苗移栽：挑选生长良好且根系较为发达的组培苗,进行炼苗。首先,将所选组培苗的瓶盖揭开,在组培室里炼苗1～3天,炼苗过程中,注意喷水保持湿度。然后将这些组培苗搬至炼苗室,炼苗2～5天。之后将小苗取出,洗净培养基,注意防止根系损伤,栽植到由园土:泥炭土:腐殖质＝2:1:1混合成的基质中，移栽30天后统计成活率。

    上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.1～1.0mg/LTDZ+1.0～3.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

    上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.5～1.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。