[发明专利]一种同时检测CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的四色荧光定量PCR方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的四色荧光定量PCR联合检测试剂盒，包括如下成分：多色荧光定量PCR MIX、核酸提取液、反转录酶系、Taq酶系、阳性质控品和阴性质控品，其特征在于：所述多色荧光定量PCR MIX中含有同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的特异性引物及探针，序列分别为：

猪瘟病毒

上游引物：CSFV-F：5’-CAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAG-3’（SEQ ID NO.1）；

下游引物：CSFV-R：5’-CGCTAGGGTTAAGGTGTGTCTTG-3’（SEQ ID NO.2）；

荧光探针：CSFV-P：5’-FAM-ACCTCGAGATGCTACGTGGACGA-BHQ1-3’（SEQ ID NO.3）；

高致病性猪蓝耳病病毒

上游引物：PRRSV-MF：5’- AGCTGATGACACCTTTGAGTGAGT-3’（SEQ ID NO.4）；

下游引物：PRRSV-MR：5’- GACAAATCCAGAGGCTCATCCT-3’（SEQ ID NO.5），

荧光探针：PRRSV-MP：5’-VIC- AGAACTGTGACAACAACGCTGACGCAC–BHQ1-3’（SEQ ID NO.6）； 

伪狂犬病毒

上游引物：PRV-F：5’-CCATGTGTGCCACTAGCATT-3’（SEQ ID NO.7）；

下游引物：PRV-R：5’-CCCCATCGCGGTTTTAA-3’（SEQ ID NO.8）；

荧光探针：PRV-P：5’-CY5-TTCCTGATTCACGCCCACG- BHQ2-3’（SEQ ID NO.9）；

猪圆环病毒2型

上游引物：PCV2-MF：5’- ATAATCAAAAAGGGAGATTGGAAGCT-3’（SEQ ID NO.10）；

下游引物：PCV2-MR：5’-GGTGGGTGTTCACGCTGAA-3’（SEQ ID NO.11）；

荧光探针：PCV2-MP：5’-ROX- CCGTATTTTCTTGCGCTCGTCTTCGG-BHQ3-3’（SEQ ID NO.12）。

2.根据权利要求1 所述的检测试剂盒，其特征在于：所述多色荧光定量PCR MIX还含有10×多色荧光定量PCR buffer、dNTPS。

3.根据权利要求1 或2所述的检测试剂盒，其特征在于：所述多色荧光定量PCR MIX具体成分及含量为：

10×多色荧光定量PCR buffer         2.5μl

CSFV-F（10μM）                     1μl

CSFV-R（10μM）                     1μl

PRRSV-MF（10μM）                1μl

PRRSV-MR（10μM）                1μl

PRV-F（10μM）                   1μl

PRV-R（10μM）                   1μl

PCV2-MF（10μM）                    1μl

PCV2-MR（10μM）                 1μl

CSFV-P（10μM）                      0.5μl

PRRSV-MP（10μM）                0.5μl

PRV-P（10μM）                   0.5μl

PCV2-MP（10μM）                     0.5μl

dNTPS (10mM)                       1μl

ddH₂O                               6.5μl

Total                              20.0μl。