[发明专利]一种同时检测CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的四色荧光定量PCR方法及其试剂盒在审

专利信息
申请号: 201510128044.7 申请日: 2015-03-20
公开(公告)号: CN104789697A 公开(公告)日: 2015-07-22
发明(设计)人: 魏文康;翟少伦;吕殿红;温肖会;周秀蓉;贾春玲;曾绮雯 申请(专利权)人: 广东省农业科学院动物卫生研究所
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
代理公司: 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 代理人: 郑莹
地址: 510640 广东*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 同时 检测 csfv prrsv prv pcv2 荧光 定量 pcr 方法 及其 试剂盒
【权利要求书】:

1.一种同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的四色荧光定量PCR联合检测试剂盒,包括如下成分:多色荧光定量PCR MIX、核酸提取液、反转录酶系、Taq酶系、阳性质控品和阴性质控品,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX中含有同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的特异性引物及探针,序列分别为:

猪瘟病毒

上游引物:CSFV-F:5’-CAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAG-3’(SEQ ID NO.1);

下游引物:CSFV-R:5’-CGCTAGGGTTAAGGTGTGTCTTG-3’(SEQ ID NO.2);

荧光探针:CSFV-P:5’-FAM-ACCTCGAGATGCTACGTGGACGA-BHQ1-3’(SEQ ID NO.3);

高致病性猪蓝耳病病毒

上游引物:PRRSV-MF:5’- AGCTGATGACACCTTTGAGTGAGT-3’(SEQ ID NO.4);

下游引物:PRRSV-MR:5’- GACAAATCCAGAGGCTCATCCT-3’(SEQ ID NO.5),

荧光探针:PRRSV-MP:5’-VIC- AGAACTGTGACAACAACGCTGACGCAC–BHQ1-3’(SEQ ID NO.6); 

伪狂犬病毒

上游引物:PRV-F:5’-CCATGTGTGCCACTAGCATT-3’(SEQ ID NO.7);

下游引物:PRV-R:5’-CCCCATCGCGGTTTTAA-3’(SEQ ID NO.8);

荧光探针:PRV-P:5’-CY5-TTCCTGATTCACGCCCACG- BHQ2-3’(SEQ ID NO.9);

猪圆环病毒2型

上游引物:PCV2-MF:5’- ATAATCAAAAAGGGAGATTGGAAGCT-3’(SEQ ID NO.10);

下游引物:PCV2-MR:5’-GGTGGGTGTTCACGCTGAA-3’(SEQ ID NO.11);

荧光探针:PCV2-MP:5’-ROX- CCGTATTTTCTTGCGCTCGTCTTCGG-BHQ3-3’(SEQ ID NO.12)。

2.根据权利要求1 所述的检测试剂盒,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX还含有10×多色荧光定量PCR buffer、dNTPS。

3.根据权利要求1 或2所述的检测试剂盒,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX具体成分及含量为:

10×多色荧光定量PCR buffer         2.5μl

CSFV-F(10μM)                     1μl

CSFV-R(10μM)                     1μl

PRRSV-MF(10μM)                1μl

PRRSV-MR(10μM)                1μl

PRV-F(10μM)                   1μl

PRV-R(10μM)                   1μl

PCV2-MF(10μM)                    1μl

PCV2-MR(10μM)                 1μl

CSFV-P(10μM)                      0.5μl

PRRSV-MP(10μM)                0.5μl

PRV-P(10μM)                   0.5μl

PCV2-MP(10μM)                     0.5μl

dNTPS (10mM)                       1μl

ddH2O                               6.5μl

Total                              20.0μl。

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