[发明专利]一种同时检测CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的四色荧光定量PCR方法及其试剂盒在审
申请号: | 201510128044.7 | 申请日: | 2015-03-20 |
公开(公告)号: | CN104789697A | 公开(公告)日: | 2015-07-22 |
发明(设计)人: | 魏文康;翟少伦;吕殿红;温肖会;周秀蓉;贾春玲;曾绮雯 | 申请(专利权)人: | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 郑莹 |
地址: | 510640 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 同时 检测 csfv prrsv prv pcv2 荧光 定量 pcr 方法 及其 试剂盒 | ||
1.一种同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的四色荧光定量PCR联合检测试剂盒,包括如下成分:多色荧光定量PCR MIX、核酸提取液、反转录酶系、Taq酶系、阳性质控品和阴性质控品,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX中含有同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的特异性引物及探针,序列分别为:
猪瘟病毒
上游引物:CSFV-F:5’-CAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAG-3’(SEQ ID NO.1);
下游引物:CSFV-R:5’-CGCTAGGGTTAAGGTGTGTCTTG-3’(SEQ ID NO.2);
荧光探针:CSFV-P:5’-FAM-ACCTCGAGATGCTACGTGGACGA-BHQ1-3’(SEQ ID NO.3);
高致病性猪蓝耳病病毒
上游引物:PRRSV-MF:5’- AGCTGATGACACCTTTGAGTGAGT-3’(SEQ ID NO.4);
下游引物:PRRSV-MR:5’- GACAAATCCAGAGGCTCATCCT-3’(SEQ ID NO.5),
荧光探针:PRRSV-MP:5’-VIC- AGAACTGTGACAACAACGCTGACGCAC–BHQ1-3’(SEQ ID NO.6);
伪狂犬病毒
上游引物:PRV-F:5’-CCATGTGTGCCACTAGCATT-3’(SEQ ID NO.7);
下游引物:PRV-R:5’-CCCCATCGCGGTTTTAA-3’(SEQ ID NO.8);
荧光探针:PRV-P:5’-CY5-TTCCTGATTCACGCCCACG- BHQ2-3’(SEQ ID NO.9);
猪圆环病毒2型
上游引物:PCV2-MF:5’- ATAATCAAAAAGGGAGATTGGAAGCT-3’(SEQ ID NO.10);
下游引物:PCV2-MR:5’-GGTGGGTGTTCACGCTGAA-3’(SEQ ID NO.11);
荧光探针:PCV2-MP:5’-ROX- CCGTATTTTCTTGCGCTCGTCTTCGG-BHQ3-3’(SEQ ID NO.12)。
2.根据权利要求1 所述的检测试剂盒,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX还含有10×多色荧光定量PCR buffer、dNTPS。
3.根据权利要求1 或2所述的检测试剂盒,其特征在于:所述多色荧光定量PCR MIX具体成分及含量为:
10×多色荧光定量PCR buffer 2.5μl
CSFV-F(10μM) 1μl
CSFV-R(10μM) 1μl
PRRSV-MF(10μM) 1μl
PRRSV-MR(10μM) 1μl
PRV-F(10μM) 1μl
PRV-R(10μM) 1μl
PCV2-MF(10μM) 1μl
PCV2-MR(10μM) 1μl
CSFV-P(10μM) 0.5μl
PRRSV-MP(10μM) 0.5μl
PRV-P(10μM) 0.5μl
PCV2-MP(10μM) 0.5μl
dNTPS (10mM) 1μl
ddH2O 6.5μl
Total 20.0μl。
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