[发明专利]一种蝴蝶兰的组培方法

说明书

技术领域

    本发明涉及植物组织培养技术，尤其是涉及一种蝴蝶兰的组培方法。

背景技术

蝴蝶兰（Phalaenopsis aphrodite Rchb. F.）为兰科蝴蝶兰属，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白色粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。新春时节，蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞舞般的花朵，深受花迷们的青睐，素有“洋兰王后”之称。

目前，蝴蝶兰属植物的离体快繁研究多集中在牡丹上，有关蝴蝶兰组织培养的国内外研究较少，已有的关于蝴蝶兰组织培养技术，仅讨论了无菌体系的建立，还没有形成一整套利用蝴蝶兰地下芽快速繁殖的方法，也没有涉及到蝴蝶兰组培苗的生根和移栽，不能为生产提供依据。

发明内容

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种蝴蝶兰的组培方法，包括蝴蝶兰茎尖获取、蝴蝶兰茎尖灭菌消毒以及对灭菌消毒后的蝴蝶兰茎尖进行初代培养、继代培养和生根培养的步骤，其特征在于：

(1) 蝴蝶兰茎尖获取：秋季剪取蝴蝶兰新萌发的小芽，经纯净水流动冲洗 30min 后放于超净工作台上；

(2) 蝴蝶兰茎尖灭菌消毒：用70％～ 75％的酒精浸泡 30 ～ 60 秒，然后用经过水稀释的1 ∶ 3的 84 消毒液浸泡 12 ～ 15 分钟，并吸干表面水分 ；

(3) 蝴蝶兰茎尖的初代培养：

1)将继代培养得到组培苗在 3 ～ 6℃冷藏 8 ～ 10 天，转接到含IBA的生根培养基上培养 15 ～ 20 天；

2) 将组培苗转接到 WPM+2％ AC 培养基上继续培养 20 ～ 30 天，生根后进行炼苗 ；

3) 将生根苗移栽到水苔藓混合营养液基质中；

(4) 蝴蝶兰的初代培养：

取小芽基部，切成 lcm 长的小段，接种于 pH 值为 5.8-6.2 的小芽诱导培养基上；

所述的初代培养的培养基为1/2MS+0.1mg/L～1mg/L GA3+1mg/L 6-BA+0.1mg/L ～ 0.5mg/L NAA +MN+2.0 mg/L；

所述的继代培养的培养基为1/2MS+0.5mg/L ～1mg/L 6-BA、1/2MS+0.1mg/L ～0.2mg/L TDZ、蔗糖 30g/L、 琼脂6g/L，

 (5) 蝴蝶兰的继代培养：

先进行暗处理5周，再给予每日光照24h，增殖培养的培养温度为24-26℃，光照为 30-40μmo1/m²s；

(6) 蝴蝶兰的生根培养培养：

当根长为 2-4cm 时，进行驯化移栽，将培养瓶移至大棚内炼苗 7-10 天，洗去培养基，根部浸泡2-9％酒精溶液进行消毒，移栽入穴盘中，覆盖薄膜，同时遮荫75％，2周后除去薄膜，给予全光照，进行肥水管理。

本发明的有益效果：

(1) 通过本发明的蝴蝶兰组培苗植株，生根率最高达到26.7％。

(2) 采用茎尖进行离体培养产生的组培苗能够保持原品种的优良性状，为良种繁育和产业化生产奠定了基础。

(3) 本发明的蝴蝶兰组织培养方法，操作简单、成本低廉，适于多数观赏蝴蝶兰的快速繁殖。

具体实施方式                   

实施例1：

一种蝴蝶兰的组培方法，包括蝴蝶兰茎尖获取、蝴蝶兰茎尖灭菌消毒以及对灭菌消毒后的蝴蝶兰茎尖进行初代培养、继代培养和生根培养的步骤，其特征在于：

(1) 蝴蝶兰茎尖获取：

秋季剪取蝴蝶兰新萌发的小芽，经纯净水流动冲洗 30min 后放于超净工作台上；

(2) 蝴蝶兰茎尖灭菌消毒：

用70％的酒精浸泡60 秒，然后用经过水稀释的1 :3的 84 消毒液浸泡 12 分钟，并吸干表面水分 ；

(3) 蝴蝶兰茎尖的初代培养：

1)将继代培养得到组培苗在 3℃冷藏 8天，转接到含IBA的生根培养基上培养 15天；

2) 将组培苗转接到 WPM+2％ AC 培养基上继续培养 20天，生根后进行炼苗 ；

3) 将生根苗移栽到水苔藓混合营养液基质中；

(4) 蝴蝶兰的初代培养：

取小芽基部，切成 lcm 长的小段，接种于 pH 值为 5.8-6.2 的小芽诱导培养基上；