[发明专利]卵形鲳鲹家系亲子鉴定的方法

权利要求书

1.一种卵形鲳鲹家系亲子鉴定的方法，该方法包括如下步骤：

1)选择卵形鲳鲹体型较大，生长速度较快的个体87尾作为亲本，将亲本混合进行人工繁殖；待鱼苗长到10公分时随机选取1万尾转入网箱养殖，作为用于亲子鉴定的家系群体；

2)选取步骤1)的卵形鲳鲹繁殖亲本的鳍条组织，提取基因组DNA，以DNA为模板，选用51对微卫星引物进行巢式PCR扩增；

3)步骤2)所述的巢式PCR扩增方法指PCR体系内包含3个引物：位点特异性正向引物，其5’末端加M13序列5’-TGTAAAACGACGGCCAGT-3’；位点特异性反向引物；FAM、PET、VIC、NED四种荧光标记的M13通用引物；PCR反应体系20μL：50ng DNA，2μL dNTP，2μL 10×Buffer mixture，1U rTaq，0.4μL的含加通用引物M13的正向引物10mM，0.5μL反向引物，0.1μL的荧光标记通用引物，ddH₂O补足；

4)卵形鲳鲹亲本在51个微卫星位点的PCR产物经ABI3730型基因分析仪，根据荧光标记进行基因型分析，使用Genemapper3.7软件模拟分析，筛选出适合鉴定卵形鲳鲹混养家系的有效微卫星位点11个：ZD13、ZD15、TBG008、ZD02、ZD03、ZD04、ZD11、ZD12、ZD01、ZD10、TBG016；所述11个有效微卫星位点是由以下引物序列5’-3’扩增获得：

ZD13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGCTAGCTTTGCATTGTGTG；

ZD13-R：CAGCCCAGTCAGTCCCTACT；

ZD15-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGACGTGTTCCACAGCAAGAA；

ZD15-R：AGGAATGGTCCCAAAGAATG；

TBG008-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCGCGACAAACTTTAACTCATCTC；

TBG008-R：AGCATTTTCACCTCCTCCATTG；

ZD02-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTAGGACACCATCCCCTCA；

ZD02-R：GCTCCTGTGGAGGACAGAGA；

ZD03-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATATCAGCGTCCACCCAAAC；

ZD03-R：CTTTTCCATCTCTCCCCTCA；

ZD04-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGTGGAGACCATGACG；

ZD04-R：CTCCTGGAGGAACTGTGGAG；

ZD11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGAGCAGGACGTCCAAAA；

ZD11-R：CTTTTCCATCTCTCCCCTCA；

ZD12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCACCATCAATCAGCTGTCA；

ZD12-R：AGGTGCTCCACAGATGTTCC；

ZD01-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGCTTGAAAAATCAGGCAAG；

ZD01-R：TGCCAGGGAAAAGAGAGAGA；

ZD10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCTGTAGAGAACCAGAACAGTC；

ZD10-R：GCTCCTGTGGAGGACAGAGA；

TBG016-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAGAAATACATCCTGGGTCACT；

TBG016-R：GAACCGGAGTCTGTAAACAAGAT；

5)将卵形鲳鲹1万条子代混养7月龄，随机选取2000尾个体，在每条鱼的背部肌肉植入电子标记并剪取每个个体鳍条组织，提取个体基因组DNA，选取步骤4)中的11个有效微卫星位点，分析子代的基因型；

6)根据亲本和子代在11个微卫星位点的基因型，采用PAPA 2.0软件对不同子代进行区分，鉴定子代个体的父母本。