[发明专利]用于对单个细胞所具有的细胞毒性进行评价的组合物以及方法

说明书

本申请为申请号为200980155152.6的分案申请，要求2009年1月21日的优先权。

发明领域

本发明提供了一种用于对发生在靶点与效应器细胞对之间的相互作用进行分析的方法，所述的方法利用高通量的筛选方法，用以对微阵列中的大量的单个细胞进行描述。

背景技术

尽管已经对发生在人类与所述的1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）之间的相互作用进行了超过二十五年的研究，人类免疫缺陷病毒（HIV）/获得性免疫缺陷综合症（AIDS）仍然是全球健康的最为盛行的威胁之一。目前的评估表明，它将成为接下来的二十年内世界范围内的死亡率的第三大重要诱因，位列于癌症以及心血管疾病之后。目前仍然没有研发出一种能够预防感染或者引发天然机制用以对所述的疾病进行控制的疫苗。单纯利用现有的分析工具并不足以能够对那些与所述的免疫系统细胞相关的至关重要的特征进行定义，其中所述的免疫系统细胞能够提供有效的针对所述病毒的保护性的免疫力。例如流式细胞术以及免疫吸附检测（酶联免疫斑点检测ELISpot，酶联免疫吸附检测ELISA）这样的技术能够对细胞群体进行评价，但是对于稀少的事件而言具有差的敏感度。其他的重要功能，例如细胞毒性以及增殖作用，目前仅仅能够被进行批量的测量。同样的，如果在可能的情况下，这样的局限性使得以足够的清楚度对所述的人类免疫应答进行评价是困难的，其中所述的人类免疫应答是针对人类免疫缺陷病毒（HIV）而产生的，对于应答所进行的评价的目的在于确定保护作用的相关性。这样一来，迫切的需要一种新的方法，用以对针对病毒的保护性免疫力进行分析，其中所述的病毒例如是人类免疫缺陷病毒（HIV）。

发明内容

本发明提供了用以识别CD8+细胞的方法，所述的CD8+细胞能够对宿主体内的CD4+人类免疫缺陷病毒（HIV）感染型细胞进行溶解，所述的方法是通过下述方式来实现的：提供一种效应器CD8+细胞以及来自于宿主的靶向细胞的悬浮液，其中所述的悬浮液被沉积于一种可模压成型的平板之上，所述的平板上含有至少一个存在于微孔阵列之中的微孔，其中在所述的微孔阵列中的至少一个微孔中含有一个效应器细胞；在允许利用所述的CD8+细胞对所述的靶向细胞进行溶解的条件下对所述的悬浮液进行培养；对利用所述的效应器细胞对所述的靶向细胞所产生的溶解进行检测，并且识别出那些能够对CD4+人类免疫缺陷病毒（HIV）感染型细胞进行溶解的CD8+细胞。任选的，对能够使所述的靶向细胞发生溶解的效应器细胞进行回收。优选的，对上述回收的效应器细胞进行培养，其中所述的效应器细胞对所述的靶向细胞进行了溶解。在一个方面，在将细胞沉积于所述的微孔内之前对所述的效应器细胞以及靶向细胞进行混合。或者可供选择的，在将细胞沉积于所述的微孔内之后对所述的效应器细胞以及靶向细胞进行混合。通过对一种被标记的细胞所具有的荧光性的变化进行监测的方式对溶解作用进行检测。或者可供选择的，通过对所述的靶向细胞所具有的细胞内的钙的水平的变化进行监测的方式对溶解作用进行检测。利用一种钙敏感性的荧光素染料对所述的钙进行检测。优选的，所述的钙敏感性荧光素染料是Fura 2AM（Invitrogen）。

在一个方面，将所述的微孔阵列与一种底物进行接触，其中利用至少一种试剂对所述的底物进行了预处理，此后利用所述的试剂进行检测，其中所述的试剂能够特异性的检测出所述的效应器细胞的一种产物。所述的试剂是一种抗体，细胞因子，或者是溶解作用的可溶性的调节剂。优选的，所述的细胞因子是肿瘤坏死因子-α（TNF-α）或者干扰素-γ（IFN-γ）。任选的，所述的溶解作用的可溶性调节剂是端粒酶B（GzB）或者穿孔蛋白。本发明所述的方法中任选的进一步包括利用CD69对一种效应器细胞进行标记。

本发明同样提供了一种对宿主体内的抗体应答进行鉴定的方法，所述的方法是通过下述方式来实现的：提供一种来自于宿主的B细胞悬浮液，其中所述的悬浮液被沉积于一种可模压成型的平板之上，所述的平板上含有存在于一个微孔阵列之中的至少一个微孔，其中所述的宿主感染有人类免疫缺陷病毒（HIV），或者所述的宿主被怀疑感染了人类免疫缺陷病毒（HIV），并且其中存在于所述的微孔阵列之中的至少一个微孔内含有一个单个的细胞；将所述的微孔阵列与一种底物进行接触，其中利用至少一种B细胞检测试剂对所述的底物进行了预处理；并且对所述的试剂进行检测，从而对所述的抗体应答进行鉴定。优选的，所述的B细胞检测试剂是一种对糖蛋白（gp）120中的一个表位具有特异性的抗体。