[发明专利]一种土壤中微生物多样性的分析方法

权利要求书

1.一种土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

A、对采集的土壤进行微生物基因组DNA提取，得到基因组DNA提取液；

B、对基因组DNA提取液进行检测确定土壤基因组DNA的浓度和纯度；

C、将从土壤中提取的DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

D、采用变性高效液相色谱对PCR扩增产物进行微生物多样性分析。

2.根据权利要求1所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤D所述变性高效液相色谱为WAVE核苷酸片段分析仪。

3.根据权利要求2所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤D中所述微生物包括细菌和/或真菌。

4.根据权利要求3所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤D中采用WAVE核苷酸片段分析仪对PCR扩增产物进行真菌多样性分析的变性温度为55℃～57℃。

5.根据权利要求3所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤D中采用WAVE核苷酸片段分析仪对PCR扩增产物进行细菌多样性分析的变性温度为60℃～63℃。

6.根据权利要求4或5所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤D中采用WAVE核苷酸片段分析仪对PCR扩增产物进行细菌多样性分析所采用的流动相包括乙腈和TEAA。

7.根据权利要求6所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，所述流动相具体为采用流动相A和流动相B的混合流动相，且所述流动相A：流动相B的体积比为40～55：45～60；所述流动相A采用50mL的TEAA用纯水定容到1L,且加200μl乙腈的方法配制而成；所述流动相B采用50mL的TEAA和250mL的乙腈混合后用纯水定容到1L的方法配制而成。

8.根据权利要求1所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤C中所述微生物为真菌，且所述PCR扩增为三次，第一次PCR扩增以

5’-CCAGTAGTCATATGCTTGTCTC-3’和

5’-ACCTTGTTACGACTTTTACTTCC-3’为引物；

第二次PCR扩增以

5’-CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGTTGGAGGGCAAGTCTGGTGCC-3’和5’-GTTTCCCGTAAGGCGCCGAA-3’为引物；

第三次PCR扩增以

5’-CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGTTGGAGGGCAAGTCTGGTGCC-3’和5’-GCCTGCTTTAAACACTCTA-3’为引物。

9.根据权利要求1所述土壤中微生物多样性的分析方法，其特征在于，步骤C中所述微生物为细菌，且所述PCR扩增以

5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’和5’-ATTACCGCGGCTCGTGG-3’为引物。