[发明专利]一种高效表达重组利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种高效表达重组利拉鲁肽的方法。

背景技术

利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于治疗糖尿病。

利拉鲁肽为人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，与天然GLP-1分子结构相比有一个氨基酸差异，并增加了一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链，但与天然人GLP-1有95％同源性，保留了天然GLP-1的功效，它可以结合并激活GLP-1受体，促进促进胰腺β细胞葡萄糖浓度依赖性地分泌胰岛素，同时以葡萄糖浓度依赖的模式降低过高的胰高糖素的分泌。由诺和诺德公司研制开发的利拉鲁肽注射剂已被证实在治疗Ⅱ型糖尿病方面具有良好效果，但需每日注射给药一次，使患者顺应性较差。

利拉鲁肽肽序列为：

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH利拉鲁肽是由丹麦诺和诺德公司开发的第一个也是目前唯一一个长效GLP-1类似物，具有GLP-1受体激动剂作用，在分子结构、生物活性、作用靶点及免疫原性等方面与GLP-1相似。利拉鲁肽的分子结构与GLP-1(7-37)的同源性达97％，结构差异表现在Lys 34被Arg替代，Lys 26经由谷氨酸介导发生棕榈酰化，脂肪酸侧链可以使利拉鲁肽在血夜中与白蛋白可逆性地结合，使利拉鲁肽的作用时间延长，且增强对DPP-4酶降解的抵抗，脂肪酸侧链还可以使利拉鲁肽分子在注射部位自交联成七聚体，从而延缓其自皮下吸引，使其作用时间可长达接近24小时，每天注射一次并且可在任意时间注射，且低血糖发生风险小。诺和诺德的利拉鲁肽通过基因工程等生物学方法进行制备，技术难度大，生产成本高，不利于利拉鲁肽的大规模生产。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的第一目的是提供一种高效表达重组利拉鲁肽的表达基因片段HIS₆-EK-利拉鲁肽，本发明的第二个目的是提供一种高效表达重组利拉鲁肽的方法，该方法通过基因工程等生物学方法进行重组表达，降低生产成本，污染减少，有利于利拉鲁肽的大规模生产。

为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种高效表达重组利拉鲁肽的表达基因片段HIS₆-EK-利拉鲁肽，该表达基因片段的序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还公开了含有上述的表达基因片段的重组表达载体。

作为优选，该重组表达载体为所述的基因片段克隆进入PET-22b载体中获得重组表达载体PET-22b-HIS₆-EK-利拉鲁肽。

作为优选，该重组表达载体采用将分子伴侣troponin C SEQ ID NO：2全长基因连接到所述的基因片段HIS₆-EK-利拉鲁肽的5`末端，最后一起克隆进入pET-22b载体，即重组为表达载体pET-22b-troponin C-HIS₆-EK-利拉鲁肽。

本发明还公开了含有上述的表达基因片段的菌株，该菌株采用表达载体pET-22b-troponin C-HIS₆-EK-利拉鲁肽转入到大肠杆菌DE3菌株中，用IPTG储液诱导重组基因的表达，离心收集菌体。

上述的菌株可以用于重组利拉鲁肽的高效表达。

为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种高效表达重组利拉鲁肽的方法，该方法包括以下的步骤：