[发明专利]测定血管性血友病因子活性的方法及检测试剂盒

权利要求书

1.分离GPIbα蛋白在制备用于在样本中测定血管性血友病因子VWF活性的试剂中的应用，其中，将所述样本和分离GPIbα蛋白混合成一种检测标本，其中，

a)所述分离GPIbα蛋白由一种氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与在SEQ ID NO:1中示出的人类GPIbα蛋白的野生型序列相比由氨基酸残基1-268组成，且分别在位置233和239上具有一种氨基酸取代缬氨酸，以及

b)在所述检测标本中不添加瑞斯托霉素和美洲矛头腹毒蛋白，以及

c)其中所用GPIbα蛋白与一种粒子固相相关。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，在所述检测标本中不添加瑞斯托霉素或美洲矛头腹毒蛋白的等效物质。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白是用重组法或合成法制备的。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白在N端上与同源的在SEQ ID NO:2中示出的人类GPIbα信号序列或一种异源信号序列融合。

5.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白在C端上与一个以上亲和标签融合。

6.根据权利要求5所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白在C端上与一个以上选自群组的亲和标签融合，该群组由组氨酸标签、Flag标签、精氨酸标签、c-Myc标签和Strep标签组成。

7.根据权利要求6所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白通过一种抗体与所述粒子固相相关。

8.根据权利要求7所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白通过一种抗GPIbα抗体与所述粒子固相相关。

9.根据权利要求7所述的应用，其中，所述GPIbα蛋白通过一种抗亲和标签抗体与所述粒子固相相关。

10.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述粒子固相由一种乳胶构成。

11.根据权利要求1所述的应用，其中，通过所述粒子固相的GPIbα介导凝集测定所述VWF活性。

12.根据权利要求11所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白通过选自VM16d和SZ 2群组的单克隆抗GPIbα抗体与所述粒子固相相关。

13.根据权利要求11所述的应用，其中，所用GPIbα蛋白在C端上与一个以上Flag标签融合，且通过抗Flag抗体与所述粒子固相相关。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的应用，其中，所述检测标本包含一洗涤剂。

15.根据权利要求14所述的应用，其中，所述洗涤剂为一选自吐温-20、哲斯特、曲拉通洗涤剂和十二烷基硫酸钠(SDS)群组的洗涤剂。

16.根据权利要求14所述的应用，其中，所述检测标本包含浓度从0.02g/L至20g/L的吐温-20。

17.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述样本为一种源自人类或动物的生物液体。

18.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述样本为一种包括一种生物液体反应混合物，所述生物液体中添加有用作基质的分离VWF。

19.一种用于确定在样本中的血管性血友病因子VWF活性的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括一种试剂，所述试剂含有GPIbα蛋白，所述GPIbα蛋白由一种氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与在SEQ ID NO:1中示出的人类GPIbα蛋白的野生型序列相比由氨基酸残基1-268组成，且分别在位置233和239上具有一种氨基酸取代缬氨酸，所述GPIbα蛋白与一种粒子固相相关。