[发明专利]一种皱盖假芝单峰多糖F212及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单峰多糖，具体涉及一种皱盖假芝单峰多糖F212及其制备方法和应用。

背景技术

20世纪80年代以来，困扰人们健康生活，甚至威胁生命的慢性病，如肥胖症、高血压病、糖尿病、高胰岛素血症等发病率逐年都在增长之中，而且发展势头迅猛。据卫生部门统计，过去10年，中国每年增加1000万慢性疾病患者，中国目前有2.6亿人患有糖尿病、肺病、肿瘤、心血管病等慢性疾病。慢性疾病患病率快速攀升,发病率和死亡率居高不下,已成为威胁我国人民健康的主要问题。此类状况在国外波及的人群也相当广泛，引起了人们的急切关注，被称为代谢综合征的病症。该代谢综合征包括一组疾病，它们都与机体物质代谢存在着密切的关系，它们的共同特点之一就是：其相应的免疫功能或偏低或低下，抵御细菌、病毒侵袭的能力降低，只要稍遇气候变化，或与感冒病人接触等，就很容易罹患呼吸道感染、感冒等病症。国内也有研究表明中老年人患慢性病及肿瘤与脾缩小和T细胞免疫功能低下成正相关。

现代分子细胞生物学研究发现，调节免疫反应平衡是改善亚健康、防止慢性病，恢复健康的科学途径。健康的免疫系统能有助于机体抵御多种病毒、细菌，使机体有效对抗日常生活的不同感染来源。

全球免疫性疾病药物市场可谓最具潜力的用药市场之一，未来5年年均复合增长率将达到10.7％，2017年总额将达到614亿美元，规模仅次于抗肿瘤和心脑血管药物市场。

发明内容

针对以上不足，本发明的目的之一在于提供一种用于增强免疫功效的皱盖假芝单峰多糖F212。

一种皱盖假芝单峰多糖F212，按照质量百分比的单糖组成为：核糖4.3％，鼠李糖0.7％，阿拉伯糖5.3％，木糖4.5％，甘露糖30.5％，葡萄糖37.3％，半乳糖17.4％。

进一步的，上述皱盖假芝单峰多糖F212的分子量为4.5852e3g/mol。

本发明的另一目的在于提供一种皱盖假芝单峰多糖F212的制备方法，该多糖F212是从皱盖假芝子实体中经热水浸提、酒精沉淀分离后，依次采用葡聚糖凝胶柱、DEAE sepharose fast flow纯化，并经过小鼠脾淋巴细胞和/或RAW264.7细胞进行活性筛选后得到。

进一步优选的，一种皱盖假芝单峰多糖F212的制备方法，包括：

(1)将皱盖假芝子实体经干燥、粉碎、水浸提，优选用热水进行浸提，得到皱盖假芝水提液，向水提液中加入酒精，优选为质量百分浓度为95％-100％的酒精，进一步优选为质量百分浓度为95％的酒精，调节至酒精质量百分浓度为80％，常温静置(优选静置过夜)后离心，将沉淀分离收集沉淀物，得到皱盖假芝粗多糖F1；

(2)溶解F1组分，加入酒精优选加入质量百分浓度为95％的酒精至酒精浓度为质量百分浓度80％，常温静置，优选静置过夜，得到沉淀物为粗多糖F2；

(3)采用葡聚糖凝胶柱对F2纯化，洗脱液为水，优选为纯水；

(4)再采用DEAE sepharose fast flow进行纯化，采用氯化钠溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，流速优选为20-40ml/min，氯化钠溶液的浓度优选为0.1、0.5、1、2Mol/l，收集得到4个组分；

(5)采用淋巴细胞和/或巨噬细胞对4个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F21；

(6)采用Sephaacyl S-200 chromatography对组分F21进行纯化，用水优选纯水进行洗脱，优选根据紫外吸收强度(例如100、500、50、9)收集，收集得到4个组分；

(7)采用淋巴细胞和/或巨噬细胞对4个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F212。

优选的，上述制备方法中的采用淋巴细胞进行活性筛选的过程包括：(1)制备淋巴细胞液；(2)向淋巴细胞液中加入样品组分；(3)培养后测定淋巴细胞的增殖情况。

优选的，上述制备方法中的采用巨噬细胞进行活性筛选的过程包括：(1)制备巨噬细胞悬液；(2)孵育后向巨噬细胞悬液中加入样品组分；(3)培养后测定巨噬细胞的增殖情况。

优选的，上述淋巴细胞可以为小鼠脾淋巴细胞。

优选的，上述巨噬细胞可以为巨噬细胞RAW264.7细胞。

本发明的另一目的在于提供一种皱盖假芝单峰多糖F212的应用，用于增强免疫，具体地，所述多糖F212用于增强淋巴细胞和/或巨噬细胞，其中，淋巴细胞可以优选为小鼠脾淋巴细胞，巨噬细胞可以优选为巨噬细胞RAW264.7细胞。