[发明专利]一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽及其应用

权利要求书

1.一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽在制备抗肿瘤诱导的血管生成的药物中的应用，其特征在于，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种如权利要求1所述的从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、从活的火水母取触腕，与0-4℃的去离子水按照体积比为1:1-1.5混合，搅拌、静置后，取沉淀重复2-4次，第一次离心，收集沉淀物；

步骤二、将步骤一得到的沉淀物与总磷酸盐浓度为0.025mol/L、pH为5.5-6.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液按照质量体积比1g:40-60mL混合，超声波破碎，第二次离心，收集上清液，得到毒液蛋白；

步骤三、取步骤二得到毒液蛋白，用总磷酸盐浓度0.025mol/L、pH为5.5-6.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释3-5倍，使之缓慢流经Histrap SP强阳离子交换柱，按照4-6倍柱体积加入氯化钠浓度为0.085-0.090mol/L、pH为5.5-6.5的第一磷酸盐缓冲溶液进行第一次淋洗，然后按照4-6倍柱体积加入氯化钠浓度为0.090-0.100mol/L、pH为5.5-6.5的第二磷酸盐缓冲溶液进行第二次淋洗，收集淋洗液得到第二淋洗液；

步骤四、取步骤三得到第二淋洗液进行缓冲溶液置换，变更缓冲溶液为总磷酸盐浓度为0.025mol/L、pH为7.5-8.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液，使之缓慢流经Histrap Q强阴离子交换柱，按照4-6倍柱体积加入氯化钠浓度为0.080-0.090mol/L、pH为7.5-8.5的第三磷酸盐缓冲溶液进行第三次淋洗，然后按照4-6倍柱体积加入氯化钠浓度为0.090-0.100mol/L、pH为7.5-8.5的第四磷酸盐缓冲溶液进行第四次淋洗，收集淋洗液得到第四淋洗液；

步骤五、取步骤四得到的第四淋洗液进行第三次离心超滤浓缩，收集上清液，减压冷冻干燥，即得所述多肽。

3.如权利要求2所述的从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，其特征在于，还包括以下步骤：

步骤一、从活的火水母取触腕，与2℃的去离子水按照体积比为1:1.3混合，搅拌、静置后，取沉淀重复3次，第一次离心，收集沉淀物；

步骤二、将步骤一得到的沉淀物与总磷酸盐浓度为0.025mol/L、pH为6.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液按照质量体积比1g:50mL混合，超声波破碎，第二次离心，收集上清液，得到毒液蛋白；

步骤三、取步骤二得到毒液蛋白，用总磷酸盐浓度0.025mol/L、pH为6.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液稀释4倍，使之缓慢流经Histrap SP强阳离子交换柱，按照5倍柱体积加入氯化钠浓度为0.087mol/L、pH为6.0的第一磷酸盐缓冲溶液进行一次淋洗，然后按照5倍柱体积加入氯化钠浓度为0.095mol/L、pH为6.0的第二磷酸盐缓冲溶液进行第二次淋洗，收集淋洗液得到第二淋洗液；

步骤四、取步骤三得到第二淋洗液进行缓冲溶液置换，变更缓冲溶液为总磷酸盐浓度为0.025mol/L、pH为8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液，使之缓慢流经经过Histrap Q强阴离子交换柱，按照5倍柱体积加入氯化钠浓度为0.085mol/L、pH为8.0的第三磷酸盐缓冲溶液进行第三次淋洗，然后按照5倍柱体积加入氯化钠浓度为0.095mol/L、pH为8.0的第四磷酸盐缓冲溶液进行第四次淋洗，收集淋洗液得到第四淋洗液；

步骤五、取步骤四得到的第四淋洗液进行第三次离心超滤浓缩，收集上清液，减压冷冻干燥，即得所述多肽。

4.如权利要求3所述的从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，其特征在于，所述步骤五超滤所使用的超滤管的截留分子量为30K。

5.如权利要求4所述的从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，其特征在于，所述一次离心的操作条件为：离心力1000G，4℃，15min；所述二次离心的操作条件为：离心力13000G，4℃，2h；所述三次离心的操作条件为：离心力5000G，4℃，1h。

6.如权利要求5所述的从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，其特征在于，所述的第一磷酸盐缓冲溶液和第二磷酸盐缓冲溶液均为总磷酸盐浓度为0.025mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液；第三磷酸盐缓冲溶液和第四磷酸盐缓冲溶液均为总磷酸盐浓度为0.025mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液。