[发明专利]一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了这种多肽的提取方法：从火水母刺细胞毒液中提取毒液蛋白，之后依次使用Histrap SP强阳离子交换柱和Histrap Q强阴离子交换柱从毒液蛋白中分所述的多肽。本发明还公开了这种多肽在制备抗肿瘤诱导的血管生成的药物中的应用。本发明的多肽能够抑制脐带静脉内皮细胞HUVEC生长，诱导脐带静脉内皮细胞HUVEC凋亡。本发明采用的提取方法操作简单，分离步骤少，适宜于快速分离；分离条件温和，能最大程度地保存所得蛋白质的抗肿瘤活性。

技术领域

本发明涉及海洋生物技术和医药领域，具体涉及一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽及其应用。

背景技术

北部湾火水母(Tamoya alata Uchida)是仅分布在我国北部湾海域的一种大型剧毒水母，触腕长且具有大量的刺丝囊细胞，内含主要活性成分为蛋白质/多肽的毒液，与人或动物接触时该刺细胞会扎入皮肤，可深入到真皮部位，并释放细胞内贮存的毒素，造成蛰伤。根据受伤严重程度不同，受害者被蛰处即时出现皮肤红肿、刺痛、流血、皮肤溃烂等现象，严重者虚弱，发热，呕吐，甚至死亡。究其原因，水母触腕的刺细胞内含有大量的水母毒素，主要是结构新颖的蛋白类物质。

水母种类不同，其生理结构以及体内所含的毒素成分和活性也存在较大差异，这就致使不同种类水母的毒素的分离纯化工作难以效仿，只能通过繁杂的试验摸索得到。所以水母毒素的分离纯化工作具有很大的难度。发明人对火水母毒液进一步研究，从该毒液中可以分离出一种具有显著抗肿瘤活性的多肽，该毒液具有显著的抗肿瘤活性，相应活性成分是一种蛋白质。

人体肿瘤内的新生血管和淋巴管分别通过血管生成和淋巴管生成实现，并在肿瘤的生长和扩散(侵袭和转移)中起重要作用。肿瘤血管的结构缺陷使得血管具有高通透性，是肿瘤转移的途径之一，不同类型的肿瘤间质血管没有本质区别，但在形态和数量上有所不同。因此，寻找一种保守的治疗方法是亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽，其能够抑制脐带静脉内皮细胞HUVEC生长，诱导脐带静脉内皮细胞HUVEC凋亡。

本发明还有一个目的提供一种所述多肽的提取方法，操作简单，分离步骤少，适宜于快速分离；分离条件温和，能最大程度地保存所得蛋白质的抗肿瘤活性。

本发明还有一个目的是提供一种所述多肽的应用。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

一种从火水母刺细胞毒液中提取的多肽的提取方法，从火水母刺细胞毒液中提取毒液蛋白，之后依次使用Histrap SP强阳离子交换柱和Histrap Q强阴离子交换柱从毒液蛋白中分离如权利要求1所述的多肽。

优选的是，所述的从火水母刺细胞毒液中提取多肽的提取方法，还包括以下步骤：

步骤一、从活的火水母取触腕，与0-4℃的去离子水按照体积比为1∶1-1.5混合，搅拌、静置后，取沉淀重复2-4次，第一次离心，收集沉淀物；

步骤二、将步骤一得到的沉淀物与总磷酸盐浓度为0.025mol/L、pH为5.5-6.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液按照质量体积比1g∶40-60mL混合，超声波破碎，第二次离心，收集上清液，得到毒液蛋白；