[发明专利]一种水体残留四环素类、氟喹诺酮类和磺胺类抗生素同步检测的方法

说明书

技术领域

本发明属于水体环境中残留抗生素的富集检测技术领域，具体涉及一种水体残留四环素类、氟喹诺酮类和磺胺类抗生素同步检测的方法。

背景技术

抗生素作为环境中新兴污染物近年来引发大量关注，由于其长期持续性输入到环境中，学术界将其称作假持久性有机物。在中国，近些年来抗生素滥用情况严重，广泛应用在畜牧业和制药业中。环境中的抗生素来源广泛，包括制药厂的生产污水未处理排放和过期药物的处置不当都会造成环境中抗生素的残留。此外，研究表明，人类及动物饲养过程中使用的抗生素，其中30％-90％未经生物体的有效利用而通过粪便等排泄物排除体外，污水处理厂无法有效去除生活污水中的抗生素，进而使得大量的抗生素进入到环境中。抗生素及其代谢产物通过多种途径进入到环境水体中，造成环境水体的污染。由于抗生素普遍具有杀菌功能，在环境中残留的抗生素有利于促进自然界中细菌的基因进化产生耐药性细菌，这将会对人类的健康及生物圈的生态平衡造成严重的威胁。

检测环境样品中抗生素残留的手段，目前主要集中于使用固相萃取-高效液相色谱串联质谱方法。该方法的优点是操作简便、耗时较短、高灵敏度、低检测限。但是，目前已有的研究中，多是针对少数几种抗生素且多属于同一类型的抗生素进行检测，虽然达到了同时检测的目的，但是方法仍具有局限性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种水体残留四环素类、氟喹诺酮类和磺胺类抗生素同步检测的方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种水体残留四环素类、氟喹诺酮类和磺胺类抗生素同步检测的方法，包括如下步骤：

(1)水样前处理：水样经膜过滤后调节pH至3～4，再加入螯合剂Na₂-EDTA，得到待富集水样；

(2)使用固相萃取小柱富集目标抗生素：依次用甲醇和超纯水活化固相萃取小柱，然后通入待富集水样，控制水样流速，使水样中的目标抗生素被吸附富集在固相萃取小柱上，样品全部导入后，用超纯水淋洗固相萃取小柱，并在真空条件下抽干固相萃取小柱，再使用甲醇洗脱，收集洗脱液并在氮气吹扫下浓缩，得到浓缩样品；

(3)上机检测：将浓缩样品用甲醇：0.1％甲酸水＝1：1的溶液定容至1mL，加入内标物，上机检测样品中四环素类、氟喹诺酮类和磺胺类抗生素的含量。

按上述方案，步骤(1)所述膜过滤的过滤膜为0.45μm玻璃纤维滤膜。所述调节pH的溶液为盐酸溶液。

按上述方案，步骤(2)所述固相萃取小柱为60mg/3mL规格的Oasis HLB小柱。

按上述方案，步骤(2)所述的水样流速为：0.5～5mL/min。

按上述方案，步骤(3)所述内标物为100ng西玛通。

按上述方案，步骤(3)所述上机检测所使用的检测设备为高效液相色谱串联质谱。

按上述方案，所述高效液相色谱的参数设置为：流动相A为乙腈，流动相B为含有0.1％甲酸和5mmol/L乙酸铵的超纯水，流速为0.25mL/min；洗脱梯度为流动相A初始浓度为15％，保持2min，后在3min内增加到90％，保持2min，然后在3min降低至15％并保持5min，洗脱总用时15min；进样体积为5μL；使用色谱柱为Extend-C18column(1.8μm,2.1mm i.d.×100mm,Agilent,USA)，温度保持40℃；所述质谱的参数设置为：阳离子模式；干燥气温度为325℃；干燥气流速为6L/min；毛细管电压为3500V；电喷雾压力为40psi。

本发明的有益效果如下：(1)本发明一次上机进样可以同时检测出水体中的多种抗生素(21种抗生素)，检测过程耗时少(耗时15min)，检测的精确度和灵敏度高，检出限低，可以检测出环境水体中痕量抗生素的残留情况；同时，本发明方法还具有高回收率，相对标准偏差较小，这说明本申请的前处理方法及检测方法可靠且重复效果好；(2)本发明检测方法操作简便，有机试剂使用量少，环境毒性低。

附图说明

图1为不同环境水样(地下水、河水、废水)中抗生素回收率比较。

图2为100μg·L^-1浓度的21种抗生素混合标准品溶液的总离子流图，横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度。

图3为环境水样中的主要残留抗生素(金霉素、多西霉素、司帕沙星、诺佛沙星、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑)的浓度-峰面积标准曲线，其中横坐标为抗生素浓度与内标浓度比值，纵坐标为抗生素峰面积与内标峰面积比值。