[发明专利]一种快速测定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种近红外光谱分析技术快速测定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法。

背景技术

人凝血因子VIII(human coagulation factor VIII，FVIII)是内源性凝血途径的一种重要的凝血因子，参与凝血因子X的激活，在正常的凝血过程中发挥着无可替代的作用。人凝血因子VIII遗传性的缺乏将导致甲型血友病，因此定期静注人凝血因子VIII制剂是甲型血友病的主要的治疗手段。目前，由于原料来源的严重缺乏，加之生产工艺的限制，我国人凝血因子VIII制剂严重短缺。

目前市场上销售的人凝血因子VIII制剂均为经过冷冻干燥得到的冻干制剂，水分是确保产品质量的一个重要参数，它的含量和存在形式对人凝血因子VIII的结构和功能影响很大，直接关系人凝血因子VIII制剂产品的稳定性。现有技术中，水分含量的测定方法一般为操作复杂、耗时耗力且具有破坏性的化学方法，不能实现制剂产品的全检，以保证流入市场药品的安全性和有效性。

发明内容

为解决现有水分含量测定方法中费时费力、具有破坏性等问题，本发明提供了一种快速测定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，本方法简单快速、绿色环保，且在隔着西林瓶、不破坏样品的情况下进行样品水分含量的测定，可实现出厂药品的全部检验。

本发明是通过以下方式实现的：

一种快速测定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，包括步骤如下：

(1)对样品进行冷冻干燥和解析干燥，在不同的干燥时间或温度条件下制备得到不同水分含量的人凝血因子VIII制剂产品；

(2)将得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制剂产品，采用近红外光谱仪直接进行近红外光谱的采集，采用卡尔费休水分测定法对各样品中的水分含量进行测定；

(3)采用SPXY方法对不同水分含量的样品集进行划分，得到用于建立模型的校正集和用于验证模型预测能力的验证集；

(4)对比不同预处理方法及建模波段下模型的评价参数，得到最佳的预处理方法及建模波段，建立用于水分含量测定的PLS定量分析模型；

(5)取冻干后的样品，进行近红外光谱的采集，将得到的样品光谱对模型进行拟合，得到人凝血因子VIII制剂产品中水分含量值。

上述方法中：

步骤(1)中优选的冷冻干燥时间为12h-48h，冷冻干燥温度为-20℃，优选的解析干燥的温度为32℃，真空度为10Pa，干燥时间为5-24h。

步骤(2)中近红外光谱仪为AntarisⅡ傅里叶变换近红外光谱仪，近红外光谱的采集条件为：光谱分辨率为8cm^-1，扫描次数为32，光谱范围为10000-4000cm^-1，每个样品采集3张光谱进行平均，将包装在西林瓶中的样品直接进行光谱的采集。

步骤(3)中采用的样品集划分方法为sample set partitioning based on joint xy distance(SPXY)法，根据2.0-2.2:1的比例进行校正集和验证集的划分，最终得到59个校正集样品和29个验证集样品。

步骤(4)中考察不同的预处理方法，预处理方法为SG 15点平滑、SNV、MSC、一阶导数SG15点平滑、SNV+一阶导数SG 15点平滑、或MSC+一阶导数SG 15点平滑，最终得到最佳的光谱预处理方法为SNV+一阶导数SG 15点平滑；对UVE、iPLS、CARS等变量选择方法进行比较，模型结果显示最佳的波段选择方法为iPLS法，选择的用于模型建立的近红外光谱波段为7471-7660cm^-1,6121-6310cm^-1,4964-5153cm^-1和4000-4189cm^-1。

步骤(5)中取冻干后的样品，按照步骤(2)中条件进行近红外光谱的采集，然后将得到的近红外光谱拟合建立的最佳PLS定量分析模型，得到人凝血因子VIII制剂产品中水分含量值。

本方法简单易行、快速无损、绿色环保，在不破坏包装和样品的情况下能准确快速测定成品中水分含量，能够实现产品的实时放行，对保证产品质量、提高药品的安全性和有效性提供重要的支撑。

附图说明

图1为本发明采集的人凝血因子VIII成品的漫反射近红外光谱；

图2为本发明经预处理后的光谱以及选择用于数学模型建立的光谱区间；

图3为本发明获得的数学模型结果图。