[发明专利]一种盐藻培养方法

说明书

技术领域：

本发明属于藻类生物培养技术领域，涉及一种盐藻培养方法，以同时增加盐藻繁殖速度，提高生物量和促进β-胡萝卜素积累，所培养的盐藻可用于医疗保健和卫生防疫技术领域。

背景技术：

盐藻是一种生存在高浓盐湖中的单细胞真核藻类，隶属于绿藻门绿藻纲团藻目盐藻科盐藻属,为绿色单细胞藻,形体微小,无细胞壁,具有糖蛋白形成的包被，是目前发现的唯一能在高浓度盐水中生存的奇特生命，由于富含独特而丰富的生命元素，被世界科学界誉为“细胞的动力源”，“生命的保护剂”，盐藻富含β-胡萝卜素，可人工培养从中提取甘油或胡萝卜素，还可作鱼、虾、贝等幼体的饵料；在医疗卫生领域可预防和辅助治疗冠心病、心脑血管疾病、糖尿病、癌症、肝脏疾病、胃部常见病、口腔溃疡、白内障、干眼症，减轻化疗不良反应、改善视力、提高免疫力、抗氧化、延缓衰老；由于盐藻无细胞壁，添加到动物饲料中,可促进饲料转化率提高动物的生长速度,减少疾病，开发“绿色饲料”对提高动物饲料产品质量具有重大意义；盐藻巨大的经济价值和独特的优点已使其成为大规模培养的对象,很多国家和地区都在培养和开发盐藻,包括澳大利亚、日本、以色列、美国等，我国的海南和内蒙古也进行了盐藻的培养，目前的培养方法采用低强度光照和温度，适合盐藻生物量的快速生长，但是不利于β-胡萝卜素的累积，而且营养元素相对缺乏，特别是氮元素，降低了营养价值；采用高强度光照和温度，有利于β-胡萝卜素的积累，但是严重影响了盐藻的生长繁殖量。因此研发既能增加盐藻繁殖速度，提高生物量，又能促进β-胡萝卜素积累的培养方法很有应用前景和社会价值。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点，寻求设计一种既能增加盐藻繁殖速度，提高生物量，又能促进β-胡萝卜素积累的工艺方法，可应用于医疗保健、卫生防疫、动物饲料领域。

为了实现上述目的，本发明涉及的盐藻培养方法包括盐藻繁殖和β-胡萝卜素积累两个步骤：

(1)盐藻繁殖：先在盐藻培育反应器内安置光源，调整光照强度为2000—4000Lx，温度为25—28℃，盐藻培养剂中的盐的重量百分比浓度为1—1.2％，氮源(KNO₃)为1—1.5mL，磷源(KH₂PO₄)为0.3mL，无机碳源(NaHCO₄)为10—15mL，在盐藻培养剂中接种盐藻，盐藻培育分别经过1—2天的生长期、1—2天的对数生长期和1—2天的平台期后分别测量盐藻培养剂中氮源(KNO₃)、磷源(KH₂PO₄)和无机碳源(NaHCO₄)，使其分别达到0.5mL、0.1mL和10mL以下时，进行盐藻生物量测定，使其达到最高值，完成盐藻繁殖；

(2)β-胡萝卜素积累：再将盐藻培育反应器内所安置的光源调节光照强度为7000—9000Lx，温度为31—35℃；向盐藻培养剂中分别添加食盐、KNO₃、KH₂PO₄、NaHCO₄，使得盐的重量百分比浓度为3.2—3.5％，氮源(KNO₃)为0.5mL，磷源(KH₂PO₄)为0.1mL，无机碳源(NaHCO₄)为10mL，再经3—5天培养后盐藻由深绿色逐渐变成褐色，实现β-胡萝卜素的积累，然后测定其β-胡萝卜素达到预期值，完成盐藻的培养。

本发明涉及的盐藻生物量测定工艺方法是：取1mL盐藻繁殖阶段的盐藻培养剂，用0.1mL无水酒精麻醉后滴入血球计数板测量得1mL中微藻绝对值，同时用分光光度计在吸光度A700nm时测定微藻绝对值对应的光密度(OD值)，分别测量5次得5个微藻绝对值和光密度(OD值)，并按照微藻绝对值和光密度(OD值)对应关系绘制盐藻生物量标准曲线，以后只需测定盐藻光密度(OD值)即可对应得出盐藻生物量，实现盐藻生物量的测定。