[发明专利]确定中药中具有心肌保护和抗炎作用的活性成分的方法

权利要求书

1.确定中药中具有心肌保护和抗炎作用的活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过制备液相色谱获得目标中药各分离组分；

(2)通过心肌细胞抗氧化模型实验确定具有心肌保护作用的活性成分，所述心肌细胞抗氧化模型实验包括：

(A)将目标中药各分离组分针对目标心肌细胞分别进行细胞毒评价，确定无显著细胞毒的目标中药各分离组分的浓度；

(B)将目标心肌细胞分别用已确定无显著细胞毒的浓度的目标中药各分离组分进行保护，然后用指定氧化剂分别对已进行保护的目标心肌细胞进行损伤，并确定损伤后的目标心肌细胞的剩余数量，并根据所述剩余数量确定目标中药各分离组分对目标心肌细胞的相对保护率；

(C)将对目标心肌细胞相对保护率达到最低有效率的目标中药分离组分经LC-MS分析，确定出相对保护率达到最低有效率的各分离组分中所包含的化学成分；

用所确定的化学成分分别代替(B)部分的目标中药各分离组分，重复执行的(B)部分的操作，确定各化学成分的相对保护率，并将相对保护率达到最低有效率的化学成分确定为具有心肌保护作用的活性成分；

(3)通过巨噬细胞抗炎模型实验确定具有抗炎作用的活性成分，其中所述巨噬细胞抗炎模型实验包括：

(a)将目标中药各分离组分针对目标巨噬细胞分别进行细胞毒评价，确定无显著细胞毒的目标中药各分离组分的浓度；

(b)将目标巨噬细胞分组培养，每组的培养液中加入一种已确定无显著细胞毒的浓度的目标中药各分离组分及指定炎症诱导剂，培养结束后，确定各培养液上清液中的NO的含量，并根据所述NO的含量确定目标中药各分离组分对目标巨噬细胞的NO相对抑制率；

(c)将对目标巨噬细胞的NO相对抑制率达到抗炎有效率的目标中药分离组分经LC-MS分析，确定出NO相对抑制率达到抗炎有效率的各分离组分中所包含的化学成分；

用所确定的化学成分分别代替(b)部分的目标中药各分离组分，重复执行(b)部分的操作，将NO相对抑制率的半数抑制浓度在指定值以下的化学成分确定为具抗炎作用的活性成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)包括：获得目标中药的中药提取液，然后使所述中药提取液通过反相色谱柱；再对反相色谱柱进行洗脱，将洗脱液通过制备液相色谱进行分离，收集目标中药各分离组分。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述获得目标中药的中药提取液，包括：

将目标中药与甲醇水溶液混合后，进行提取、过滤，得到中药提取液；

所述反相色谱柱具体为：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的中压反相色谱柱。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述(A)将目标中药各分离组分针对目标心肌细胞分别进行细胞毒评价，确定无显著细胞毒的目标中药各分离组分的浓度，具体为：

将H9c2心肌细胞在不加任何药物、分别加入第一指定浓度的目标中药各分离组分的情况下，在相同的条件下进行培养；培养结束后，确定不加任何药物及分别加入第一指定浓度的目标中药各分离组分的H9c2心肌细胞的数量；并以不加任何药物的H9c2心肌细胞的数量为标准，分别计算加入第一指定浓度的目标中药各分离组分后H9c2心肌细胞存活率；如果存活率在85％以上，则确定所述第一指定浓度为无显著细胞毒的该目标中药分离组分的浓度。